磺酰脲類除草劑氯嘧磺�。–hlorimuron-ethyl）殘留藥害對(duì)農(nóng)業(yè)產(chǎn)生巨大的影響,本研究針對(duì)這一問題做了系統(tǒng)的研究。從多年施用氯嘧磺隆的土壤中分離出具有較高降解效果的菌株,研究其生長特性和降解特性,通過模擬土壤環(huán)境研究其實(shí)際應(yīng)用效果,還從土壤酶和土壤微生物類群方面研究了氯嘧磺隆對(duì)土壤微生態(tài)的影響。 1、采用多年施用氯嘧磺隆的大豆田土壤作為研究材料,經(jīng)過多次馴化培養(yǎng)后,最終得到菌株24株,其中細(xì)菌13株、真菌7株、放線菌4株,該菌種資源為氯嘧磺隆降解機(jī)制研究和商業(yè)化菌劑開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上,采用高效液相色譜分析進(jìn)一步測(cè)定其對(duì)氯嘧磺隆的降解率,獲得了具有較高降解效率的菌株4個(gè),降解率均達(dá)50%以上；并對(duì)其進(jìn)行了菌種鑒定,D3為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、L1為蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）、L3巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）和C4a為長枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）。結(jié)合生物學(xué)方法,進(jìn)一步分析了不同環(huán)境因子對(duì)生長和降解效率的影響,并且實(shí)驗(yàn)室模擬環(huán)境測(cè)定菌株L3對(duì)氯嘧磺隆污... 

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 磺酰脲類除草劑的使用情況簡(jiǎn)介
        1.1.1 磺酰脲類除草劑的作用機(jī)理
        1.1.2 磺酰脲類除草劑的種類
        1.1.3 磺酰脲類除草劑在應(yīng)用中出現(xiàn)的問題
        1.1.4 磺酰脲類除草劑的降解
    1.2 農(nóng)藥殘留的微生物修復(fù)
        1.2.1 應(yīng)用在農(nóng)藥降解中的微生物種類
        1.2.2 微生物降解除草劑的機(jī)理
        1.2.3 微生物修復(fù)存在的問題和展望
    1.3 氯嘧磺隆的應(yīng)用及其降解
        1.3.1 氯嘧磺隆簡(jiǎn)介
        1.3.2 氯嘧磺隆的理化性質(zhì)
        1.3.3 氯嘧磺隆的作用特性
        1.3.4 土壤中的狀況及其后茬的安全性
        1.3.5 氯嘧磺隆的檢測(cè)方法
        1.3.6 氯嘧磺隆降解菌的篩選
    1.4 農(nóng)藥對(duì)土壤微生態(tài)的影響
        1.4.1 農(nóng)藥對(duì)土壤微生物種群的影響
        1.4.2 農(nóng)藥對(duì)土壤酶活性的影響
    1.5 變性凝膠電泳(DGGE)在微生物微生態(tài)學(xué)上的應(yīng)用
        1.5.1 DGGE原理
        1.5.2 DGGE在微生物生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用
        1.5.3 DGGE技術(shù)的局限性
        1.5.4 DGGE的前景展望
    1.6 本研究的內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.6.1 研究內(nèi)容
        1.6.2 技術(shù)路線
2 降解菌株的篩選、分離與鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料和儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 儀器設(shè)備
    2.2 氯密磺隆降解菌株的馴化、分離和降解率的測(cè)定方法
        2.2.1 氯嘧磺隆降解菌株的馴化和分離
        2.2.2 氯嘧磺隆含量的測(cè)定
        2.2.3 氯嘧磺隆降解率的測(cè)定
    2.3 降解菌株的鑒定
        2.3.1 細(xì)菌菌株形態(tài)觀察及生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定
        2.3.2 生理生化特征鑒定
        2.3.3 分子序列分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4.1 氯嘧磺隆降解菌株純化與降解率測(cè)定的結(jié)果
        2.4.2 菌株鑒定結(jié)果
    2.5 本章小結(jié)
3 氯嘧磺隆降解菌株的生長特性和降解特性的研究
    3.1 材料及儀器
    3.2 降解菌株的培養(yǎng)條件優(yōu)化
        3.2.1 菌落數(shù)-OD(600)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定
        3.2.2 菌株最適生長pH值測(cè)定
        3.2.3 菌株最適生長溫度測(cè)定
        3.2.4 菌株最適轉(zhuǎn)速測(cè)定
        3.2.5 接種量對(duì)氯嘧磺隆高效降解細(xì)菌生長的影響
        3.2.6 通氣量對(duì)氯嘧磺隆高效降解細(xì)菌生長的影響
        3.2.7 生長曲線的測(cè)定
    3.3 降解特性的研究
        3.3.1 溫度對(duì)降解率的影響
        3.3.2 初始pH對(duì)降解率的影響
        3.3.3 接種量對(duì)降解率的影響
        3.3.4 氯嘧磺隆初始濃度對(duì)降解率的影響
        3.3.5 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)降解率的影響
    3.4 模擬環(huán)境中菌株L3對(duì)氯嘧磺隆降解的影響
        3.4.1 生物法測(cè)定菌株L3對(duì)氯嘧磺隆的降解
        3.4.2 模擬土壤環(huán)境中菌株L3對(duì)氯嘧磺隆的降解
    3.5 菌株生長條件的優(yōu)化結(jié)果
        3.5.1 菌株L3活菌數(shù)及OD值的關(guān)系
        3.5.2 初始pH對(duì)菌株L3生長的影響
        3.5.3 溫度對(duì)菌株L3生長的影響
        3.5.4 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)菌株L3生長的影響
        3.5.5 接種量對(duì)菌株L3生長的影響
        3.5.6 裝液量對(duì)菌株L3生長的影響
        3.5.7 菌株L3生長曲線的測(cè)定
    3.6 菌株L3降解氯嘧磺隆條件的優(yōu)化
        3.6.1 溫度對(duì)菌株L3降解氯嘧磺隆的影響
        3.6.2 接種量對(duì)菌株L3降解氯嘧磺隆的影響
        3.6.3 初始農(nóng)藥濃度對(duì)菌株L3降解氯嘧磺隆的影響
        3.6.4 初始pH值對(duì)菌株L3降解氯嘧磺隆的影響
        3.6.5 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)菌株L3降解氯嘧磺隆的影響
        3.6.6 菌株L3對(duì)氯嘧磺隆降解曲線的繪制
        3.6.7 生物測(cè)定法測(cè)定菌株L3對(duì)氯嘧磺隆的降解影響
        3.6.8 土壤模擬實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)氯嘧磺隆降解的影響
    3.7 本章小結(jié)
4 氯嘧磺隆降解酶的性質(zhì)研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料和藥品
        4.1.2 儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 粗酶液的提取
        4.2.2 氯嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)曲線
        4.2.3 降解酶定位
        4.2.4 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定
        4.2.5 產(chǎn)酶曲線的測(cè)定
        4.2.6 pH對(duì)粗酶液酶促反應(yīng)的影響
        4.2.7 溫度對(duì)粗酶液酶促反應(yīng)的影響
        4.2.8 粗酶液的酸堿穩(wěn)定性測(cè)定
        4.2.9 粗酶液的熱穩(wěn)定性測(cè)定
        4.2.10 金屬離子對(duì)粗酶液的影響
    4.3 結(jié)果分析
        4.3.1 氯嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定
        4.3.2 降解酶位置的確定
        4.3.3 蛋白曲線的測(cè)定
        4.3.4 菌株不同時(shí)間段內(nèi)產(chǎn)酶和降解率的關(guān)系
        4.3.5 溫度對(duì)降解酶降解氯嘧磺隆的影響
        4.3.6 pH值對(duì)氯嘧磺隆降解酶對(duì)氯嘧磺隆降解率的影響
        4.3.7 恒溫保存對(duì)降解酶活性的影響
        4.3.8 pH保存對(duì)降解酶活性的影響
        4.3.9 金屬離子對(duì)降解酶活性的影響
    4.4 本章小結(jié)
5 氯嘧磺隆對(duì)土壤中微生態(tài)的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料和藥品儀器
        5.1.2 土壤處理
    5.2 土壤酶活性的測(cè)定方法
        5.2.1 過氧化氫酶活性的測(cè)定
        5.2.2 多酚氧化酶活性的測(cè)定
        5.2.3 蛋白酶活性的測(cè)定
        5.2.4 脲酶活性的測(cè)定
        5.2.5 蔗糖酶活性的測(cè)定
        5.2.6 脫氫酶活性的測(cè)定
    5.3 氯嘧磺隆對(duì)土壤微生物的影響
        5.3.1 土壤樣品的處理
        5.3.2 土壤微生物的測(cè)定
    5.4 土壤細(xì)菌菌群的DGGE分析方法
        5.4.1 土壤細(xì)菌基因組DNA提取
        5.4.2 土壤基因組DNA16SrDNA片段的PCR擴(kuò)增
        5.4.3 變性凝膠電泳
        5.4.4 染色
        5.4.5 割膠回收
        5.4.6 指紋圖譜分析
        5.4.7 克隆和序列分析
    5.5 土壤酶測(cè)定結(jié)果分析
        5.5.1 氯嘧磺隆對(duì)于土壤過氧化氫酶活性的影響
        5.5.2 氯嘧磺隆對(duì)于土壤多酚氧化酶活性的影響
        5.5.3 氯嘧磺隆對(duì)于土壤蛋白酶活性的影響
        5.5.4 氯嘧磺隆對(duì)于土壤脲酶活性的影響
        5.5.5 氯嘧磺隆對(duì)于土壤蔗糖酶活性的影響
        5.5.6 氯嘧磺隆對(duì)于土壤脫氫酶活性的影響
    5.6 氯嘧磺隆對(duì)土壤菌群的影響分析
        5.6.1 氯嘧磺隆對(duì)土壤中細(xì)菌的影響
        5.6.2 氯嘧磺隆對(duì)土壤中真菌的影響
        5.6.3 氯嘧磺隆對(duì)土壤中放線菌的影響
    5.7 土壤菌群的DGGE分析結(jié)果
        5.7.1 土壤DNA提取結(jié)果
        5.7.2 特異性引物的PCR擴(kuò)增
        5.7.3 氯嘧磺隆對(duì)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
    5.8 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]磺酰脲類除草劑的發(fā)展現(xiàn)狀、市場(chǎng)與未來趨勢(shì)[J]. 張敏恒.  農(nóng)藥. 2010(04)
[4]降解菌2N3對(duì)被氯嘧磺隆污染土壤的生物修復(fù)[J]. 汪佳秀,張祥輝,穆文輝,張浩.  農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào). 2010(01)
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本文編號(hào)：3700259