多菌靈（carbendazim，MBC），化學名稱為N-（2-苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯，是一種高效廣譜低毒的內吸性殺菌劑，屬于苯胺類苯并咪唑衍生物，其使用范圍較廣，既可作為工業(yè)殺菌劑，又可作為一種有內吸活性的植物殺菌劑，用于水果保鮮、蔬菜、果樹和谷類作物的病害防治。多菌靈化學性質穩(wěn)定，在土壤中降解半衰期較長，能持久地殘留在使用部位，易致累積效應，其在水體和土壤中的累積會對生態(tài)環(huán)境和人類健康造成威脅。有研究表明，微生物降解是沉積環(huán)境中多菌靈去除的主要途徑。因此尋找并研究多菌靈降解菌是十分必要的。山西省農藥重點實驗室已分離篩選出一株細菌NY97-1，經試驗證明該菌具有降解多菌靈的特性，若能進一步研究其降解能力、降解條件，為其在生物修復中的應用提供依據和實驗材料，無疑具有重要的理論和現(xiàn)實意義。綠色熒光蛋白（GFP）基因作為標記基因，被廣泛應用于環(huán)境微生物學方面，由于其表達穩(wěn)定，容易觀測，因此，可以以GFP作為報告基因，對菌株NY97-1進行GFP標記，為今后研究多菌靈降解菌在自然環(huán)境中的定殖、分布及動態(tài)變化打下基礎。本文的主要研究內容有如下幾個方面：1．該菌株NY97-1的16S rDNA經... 

【文章來源】：山西大學山西省

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第一章 前言
    1. 生物降解
        1.1 微生物在生物圈進化中的作用
        1.2 生物降解及生物降解能力
        1.3 生物降解與微生物生理活性物質
        1.4 檢測生物降解能力的原則
        1.5 利用環(huán)境樣品和純培養(yǎng)菌進行生物降解實驗
    2. 綠色熒光蛋白在環(huán)境微生物中的應用
        2.1 綠色熒光蛋白簡介
        2.2 綠色熒光蛋白分子的結構及特性
        2.3 綠色熒光蛋白的性質
        2.4 綠色熒光蛋白的檢測方法
        2.5 綠色熒光蛋白在微生物降解污染物研究中的應用
    3. 殺菌劑多菌靈研究進展
        3.1 理化性質
        3.2 生態(tài)毒理
        3.3 多菌靈的殘留檢測方法
        3.4 多菌靈的生物修復技術
        3.5 多菌靈的降解機制
    4. 本論文的研究目的重點及意義
第二章 多菌靈降解菌NY97-1分類學地位的確定
    1. 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 形態(tài)特征及生理生化反應
        1.3 以染色體DNA為模板PCR擴增16S rDNA
        1.4 以單菌落為模板PCR擴增16S rDNA
    2. 結果
        2.1 生理生化特性
        2.2 16S rDNA序列的NCBI在線BLAST比對結果
    3. 討論
第三章 NY97-1的綠色熒光蛋白標記
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 主要試劑與儀器
        1.3 NY97-1基因組DNA啟動子基因文庫的構建
        1.4 強啟動子片斷的序列測定及分析
        1.5 NY97-1組成型啟動子活性片段的亞克隆及GFP基因穿梭表達載體的構建
        1.6 重組DNA的電轉化重組DNA的電轉化
        1.7 轉化子的熒光檢測
        1.8 轉化子的穩(wěn)定性檢測
    2. 結果
        2.1 啟動子基因文庫的構建
        2.2 強啟動子片斷的測序分析
        2.3 穿梭表達載體的構建
        2.4 轉化子的熒光檢測與穩(wěn)定性檢測
    3. 討論
第四章 NY97-1降解多菌靈的研究
    1. 材料與方法
        1.1 材料與儀器
        1.2 多菌靈降解率的檢測
        1.3 菌懸液的制備
        1.4 多菌靈濃度對菌株降解多菌靈的影響
        1.5 氮源對菌株降解多菌靈的影響
        1.6 pH值對菌株降解多菌靈的影響
        1.7 培養(yǎng)溫度對菌株降解多菌靈的影響
    2. 結果
        2.1 多菌靈標準曲線的繪制
        2.2 多菌靈濃度對菌株降解多菌靈的影響
        2.3 氮源對菌株降解多菌靈的影響
        2.4 pH值對菌株降解多菌靈的影響
        2.5 培養(yǎng)溫度對菌株降解多菌靈的影響
    3. 討論
    4. 結論
第五章 NY97-1對多菌靈毒力的影響
    1. 試驗材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 菌株NY97-1對六種病原真菌的拮抗性能測定
        1.3 多菌靈對六種病原真菌的毒力測定
        1.4 低濃度多菌靈與NY97-1菌液混配對六種病原真菌的共同作用
    2. 結果
        2.1 NY97-1對六種枯萎病原菌的拮抗效果
        2.2 多菌靈單劑對六種枯萎病原菌的毒力測定結果
        2.3 多菌靈與NY97-1菌液對六種枯萎病原菌的共同作用
    3. 小節(jié)與討論
第六章 多菌靈對黃瓜抗氧化酶及ATP酶的影響
    1. 材料與方法
        1.1 儀器與試劑
        1.2 試驗設計
        1.3 樣品預處理及酶活性測定
    2. 結果與分析
        2.1 不同濃度多菌靈對黃瓜SOD活性的影響
        2.2 不同濃度多菌靈對黃瓜CAT活性的影響
X活性的影響">        2.3 不同濃度多菌靈對黃瓜GP_X活性的影響
+-ATP活性的影響">        2.4 不同濃度多菌靈對黃瓜Na⁺-ATP活性的影響
2+-ATP活性的影響">        2.5 不同濃度多菌靈對黃瓜Mg²⁺-ATP活性的影響
    3. 討論
第七章 多菌靈降解菌的使用對多菌靈脅迫下黃瓜抗氧化酶及ATP酶的影響
    1. 材料方法
        1.1 供試土壤
        1.2 供試菌株
        1.3 殺菌劑多菌靈及其降解菌的使用
        1.4 測定方法
        1.5 數據處理
    2. 結果與分析
        2.1 降解菌的使用對黃瓜細菌蛋白的含量的影響
        2.2 降解菌的使用對黃瓜SOD酶的影響
        2.3 降解菌的使用對黃瓜CAT酶的影響
        2.4 降解菌的使用對黃瓜ATP酶的影響
    3. 討論
第八章 本文主要研究結論及展望
    1. 本文主要研究結論
        1.1 關于PCR擴增16S rDNA基因序列時模板的選擇
        1.2 GFP標記的思路
        1.3 菌株的多重功能——降解多菌靈與拮抗六種枯萎病原菌
        1.4 多菌靈單劑及其與NY97-1活體菌液混合使用對六種枯萎病原菌的毒力
        1.5 菌株NY97-1降解多菌靈的能力
        1.6 多菌靈對黃瓜抗氧化酶的影響
    2. 論文創(chuàng)新之處
    3. 本文工作的重點及對今后工作的展望
參考文獻
攻讀博士期間發(fā)表的論文
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]油菜植株及其土壤中多菌靈殘留檢測及動態(tài)[J]. 游子涵,陳智東,柳訓才,薛愛芳,李勝清,陳浩.  農藥. 2006(08)
[3]萘降解細菌的分離及其降解基因的分子檢測[J]. 李永君,趙化冰,任河山,梁靖,蔡寶立.  生態(tài)學雜志. 2006(07)
[4]高效液相色譜測定甘藍中多菌靈殘留分析方法[J]. 劉麗英,李桂榮,劉麗華.  農藥科學與管理. 2006(07)
[5]有機污染物生物降解模擬試驗[J]. 張樂,蔡磊明,王捷.  農藥. 2006(07)
[6]多菌靈降解菌株djl-6-2的分離、鑒定及降解特性[J]. 許敬亮,王志春,王堃,李順鵬.  中國環(huán)境科學. 2006(03)
[7]篩選菌種酶催化降解微囊藻毒素的特點[J]. 何宏勝,閆海,周潔,葛世友,肖寶清,呂樂.  環(huán)境科學. 2006(06)
[8]多菌靈和五氯酚鈉的光降解和光催化降解初探[J]. 陳建秋,王鐸,婁紅瑞.  現(xiàn)代農藥. 2006(02)
[9]固相微萃取-高效液相色譜-熒光檢測法測定番茄中的多菌靈和噻菌靈[J]. 胡彥學,楊秀敏,王志,王春,趙錦.  色譜. 2005(06)
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本文編號：2974183