【摘要】：蜱是一類以吸食哺乳類、鳥(niǎo)類和爬行類血液為生的體外寄生蟲(chóng)，傳播的病原體比其它任何節(jié)肢類動(dòng)物都要多，是一種危害嚴(yán)重的疾病媒介。全球每年由蜱類叮咬、傳播疾病等引起的損失進(jìn)二百億美元，并且過(guò)去的二十年中蜱媒疾病的傳播范圍在逐漸擴(kuò)大也越來(lái)越成為公眾健康問(wèn)題關(guān)注的焦點(diǎn)。人類在抵御蜱類寄生方面一直進(jìn)行著不懈努力。本論文以美洲花蜱Amblyomma americanum和長(zhǎng)角血蜱Haemaphysalis longicornis為研究對(duì)象，分別從毒理學(xué)、生理學(xué)、神經(jīng)生理學(xué)和分子生物學(xué)方向?qū)χ参锞偷臍⑾x(chóng)活性、蜱中毒后的生理學(xué)反應(yīng)和神經(jīng)系統(tǒng)電生理活動(dòng)的變化以及蜱類先天免疫機(jī)制進(jìn)行了研究。論文成果對(duì)于蜱類防治藥物的研究、更深入的了解殺蟲(chóng)劑導(dǎo)致害蟲(chóng)死亡的最終原因、探索蜱類與病原體相互作用關(guān)系和蜱類的適應(yīng)機(jī)制具有重要意義。本論文主要的研究結(jié)果如下： 1、以饑餓階段美洲花蜱若蜱為對(duì)象，利用毒理學(xué)方法檢測(cè)了墨西哥牛至Lippia graveolens、多香果Pimenta dioica和荊芥Nepeta cataria L.三種植物粗提精油的殺蟲(chóng)活性。結(jié)果顯示，三種植物精油對(duì)美洲花蜱都具有致死毒性，尤其在處理后24小時(shí)死亡率達(dá)到80%以上。半數(shù)致死劑量（LC50）以及處理后3小時(shí)和6小時(shí)死亡率和劑量之間的線性關(guān)系顯示，同時(shí)間點(diǎn)墨西哥牛至的毒性顯著高于多香果和荊芥，而后兩者未表現(xiàn)出顯著差異。 為了為后面工作提供依據(jù)，對(duì)兩種化學(xué)性殺蟲(chóng)劑—氯菊酯permethrin和阿米曲拉amitraz作用于美洲花蜱雌蜱的致死和半致死劑量也進(jìn)行了測(cè)試，兩者的致死和半致死劑量分別為0.010%、0.005%和16μg μl~(-1)、8μg μl~(-1)。 2、利用直流呼吸運(yùn)動(dòng)計(jì)量法對(duì)氯菊酯和阿米曲拉以及兩者混合劑作用后美洲花蜱雌蜱的氣體交換和水分平衡進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，所有對(duì)照組個(gè)體的呼吸都為不連續(xù)氣體交換模式。氯菊酯處理的個(gè)體最初呼吸強(qiáng)烈之后轉(zhuǎn)變?yōu)楦哳l率的不連續(xù)模式，而阿米曲拉和混合劑處理后的呼吸呈明顯的混亂狀態(tài)。正常組和丙酮處理組的標(biāo)準(zhǔn)代謝率分別為0.461and0.452μl h~(-1)，且兩組間無(wú)顯著差異。三個(gè)殺蟲(chóng)劑處理組的標(biāo)準(zhǔn)代謝率顯著高于對(duì)照組，氯菊酯處理組為1.054μl h~(-1)、阿米曲拉處理組為1.392μl h~(-1)、混合劑處理組為1.520μl h~(-1)。氯菊酯處理后1-2小時(shí)內(nèi)蟲(chóng)體大量失水，且在不連續(xù)呼吸模式出現(xiàn)后每次呼吸都伴隨水分丟失。與氯菊酯處理組相比，混合劑處理后個(gè)體同樣大量失水，但這種失水現(xiàn)象不局限于處理后的1-2小時(shí)而是整個(gè)記錄過(guò)程，然而未發(fā)現(xiàn)與呼吸同步的失水。對(duì)照組和阿米曲拉處理組未表現(xiàn)大量失水的現(xiàn)象。這些結(jié)果表明氯菊酯破壞了蜱體內(nèi)水分保持機(jī)制，阿米曲拉使氣門控制系統(tǒng)過(guò)度興奮，而混合劑則引起兩種藥物的雙重反應(yīng)。 3、采用電生理學(xué)手段研究了氯菊酯、阿米曲拉及其混合劑處理后美洲花蜱附肢運(yùn)動(dòng)肌電信號(hào)活動(dòng)的變化。實(shí)驗(yàn)中共記錄到兩種信號(hào)，分別命名為S1和S2。正常情況下蜱附肢中的神經(jīng)信號(hào)具有較明顯的模式，具有清晰的S1放電簇且記錄到的兩種信號(hào)差異明顯。氯菊酯、阿米曲拉以及兩者的混合劑處理后運(yùn)動(dòng)肌電信號(hào)出現(xiàn)了不同的變化。氯菊酯處理后S1放電簇頻率降低但時(shí)長(zhǎng)延長(zhǎng)，阿米曲拉處理后S1放電簇逐漸紊亂，最終無(wú)明顯規(guī)律，混合劑處理后出現(xiàn)了疊加性的反應(yīng)，而處理1小時(shí)之后的反應(yīng)也顯示雙重機(jī)制作用下蟲(chóng)體神經(jīng)系統(tǒng)功能癱瘓。 4、從長(zhǎng)角血蜱雄蜱附腺cDNA文庫(kù)中分離得到編碼抗菌肽的基因�；蛉L(zhǎng)349bp，編碼79個(gè)氨基酸的防御素蛋白，基因被命名為HlMS-defensin。反轉(zhuǎn)錄PCR顯示HlMS-defensin只在雄蜱中表達(dá)。采用real-time PCR技術(shù)分析了雄蜱不同組織和各吸血階段HlMS-defensin的表達(dá)情況。結(jié)果表明HlMS-defensin主要在雄蜱附腺中表達(dá)并且隨著吸血時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量也不斷升高。對(duì)成熟肽合成蛋白的抗菌活性分析顯示HlMS-defensin對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌和真菌都具有活性。上述結(jié)果表明蜱類很可能通過(guò)抗菌肽來(lái)保護(hù)生殖系統(tǒng)不被病原微生物感染。
【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：X174
【圖文】：

也克隆鑒定到一條具明顯防御素特點(diǎn)的多肽（Johns et al., 2001）。此后，又有許多蜱源防御素被陸續(xù)分離鑒定，這些多肽多在雌蜱唾液腺和中腸中表達(dá)（Cruzet al., 2010; Pichu et al., 2009; Saito et al., 2009）（圖1）。

也克隆鑒定到一條具明顯防御素特點(diǎn)的多肽（Johns et al., 2001）。此后，又有許多蜱源防御素被陸續(xù)分離鑒定，這些多肽多在雌蜱唾液腺和中腸中表達(dá)（Cruzet al., 2010; Pichu et al., 2009; Saito et al., 2009）（圖1）。

圖 1.1 墨西哥牛至葉子粗提精油處理后美洲花蜱若蜱的死亡率。A: 1h，B：3h，C：6h，D：24h。濃度從左至右依次為 0（對(duì)照組）、0.04、0.07、0.15、0.29、0.58、1.17、2.33 和4.66 μg cm-2。Fig. 1.1 Mortality of nymphal Amblyomma americanum treated by essential oil of Lippiagraveolens leaves. A: 1h, B: 3h, C: 6h, D: 24h.率全部為 100%。表 1.1 列出了墨西哥牛至、多香果和荊芥三種植物粗提精油對(duì)美洲花蜱若蜱濃度-死亡率關(guān)系的概率分析結(jié)果。結(jié)果顯示三種植物精油對(duì)美洲花蜱毒性程度不盡相同，其中同時(shí)間點(diǎn)相比墨西哥牛至的 LC50和 LC90值最低，并且置信區(qū)間與多香果和荊芥之間不存在重疊，說(shuō)明墨西哥牛至的毒性明顯高于后兩者。相比而言，多香果和荊芥的 LC50和 LC90值要高很多，尤其處理后 1、3、6 小時(shí)的 LC50和 LC90比墨西哥牛至高幾十倍甚至幾百倍，并且兩者的置信區(qū)間也存在重疊現(xiàn)象，說(shuō)明這兩種藥物毒性相近。斜率值的大小反映了藥物濃度變化

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張召兄;潘曉亮;任耀軍;;抗菌肽概述及抗菌分子機(jī)理的研究進(jìn)展[J];草食家畜;2006年04期

2 林承德;彭鴻娟;王衍海;;抗菌肽的應(yīng)用及存在的問(wèn)題[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2007年01期

3 黃瑩;張守純;趙越;張哲;張宇;趙旭;;抗菌肽基因工程研究進(jìn)展及其在畜牧生產(chǎn)體系中的應(yīng)用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年30期

4 張?chǎng)?苗向陽(yáng);尹遜河;馬艷芳;曲朝杰;張秋婷;;抗菌肽在轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物中的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2009年02期

5 馮興軍;王建華;單安山;;抗菌肽基因工程研究及其表達(dá)策略[J];中國(guó)生物工程雜志;2006年03期

6 李敏惠;楊平;何正波;;昆蟲(chóng)抗菌肽及其基因工程研究進(jìn)展[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào);2006年03期

7 王德成;佘敏;佘銳萍;李文貴;王英華;孫泉;;抗菌肽的構(gòu)效關(guān)系及其基因表達(dá)調(diào)控的研究進(jìn)展[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2008年03期

8 崔奕;王平;黃赤夫;;抗菌肽的基因工程研究及應(yīng)用[J];中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

9 楊學(xué)明;江林源;蔣和生;;水生動(dòng)物抗菌肽及其基因工程研究[J];生物技術(shù)通訊;2006年01期

10 韓俊友;喬紅偉;趙瑞利;胡博;謝芳;王金玲;鄭偉;雷連成;韓文瑜;;牛蛙(Rana catesbeiana)蛙皮抗菌肽基因的克隆、測(cè)序及其表達(dá)[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 汪以真;韓菲菲;;豬源抗菌肽抗菌、免疫、表達(dá)特性及其營(yíng)養(yǎng)調(diào)控的研究進(jìn)展[A];飼料營(yíng)養(yǎng)研究進(jìn)展（2010）[C];2010年

2 徐家萍;王成林;楊瑩;尤征英;;多功能抗菌肽及其分子改造的研究進(jìn)展[A];華東·華中地區(qū)第十二次蠶種學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

3 尚德靜;白冰;李曉帆;付欣;鄭俊杰;;中國(guó)林蛙(Rana chensinensis)皮膚抗菌肽基因和功能多樣性研究[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

4 孫振鈞;;蚯蚓抗菌肽研究進(jìn)展[A];畜牧業(yè)環(huán)境、生態(tài)、安全生產(chǎn)與管理——2010年家畜環(huán)境與生態(tài)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

5 李蓮瑞;陳根元;顧海洋;;新疆扁吻魚(yú)抗菌肽基因的克隆和分析[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開(kāi)發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 柯濤;毛晗;董彩華;郭學(xué)蘭;黃思良;劉勝毅;;油菜抗菌肽基因的生物信息學(xué)分析[A];基因開(kāi)啟未來(lái)：新時(shí)代的遺傳學(xué)與科技進(jìn)步——湖北省遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

7 孫偉;沈以紅;王曉瑩;向仲懷;張澤;;家蠶抗菌肽基因的進(jìn)化[A];中國(guó)蠶學(xué)會(huì)第六屆青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（3）[C];2009年

8 江麗娜;雷連成;韓文瑜;;牛蛙抗菌肽基因的真核表達(dá)及批量生產(chǎn)條件的初探[A];2008年中國(guó)微生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2008年

9 趙東紅;戴祝英;周開(kāi)亞;張林元;;人工合成家蠶抗菌肽基因類CMIV在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)(摘要)[A];紀(jì)念六足學(xué)會(huì)創(chuàng)建八十周年、江蘇省昆蟲(chóng)學(xué)會(huì)四十周年論文集粹[C];2000年

10 楊小蓉;朱家勇;;一個(gè)新家蠅抗菌肽基因——diptericin的克隆與生物信息學(xué)分析[A];全國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 曹繼軍 通訊員 趙如江;我科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)附睪中一種抗菌肽基因[N];光明日?qǐng)?bào);2001年

2 張學(xué)全;我國(guó)生命科學(xué)研究領(lǐng)域取得重大突破[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

3 吳存遠(yuǎn)　記者 朱彤;我首次證實(shí)綿羊生殖系統(tǒng)中存在抗菌肽[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

4 ;原來(lái)生育可調(diào)控[N];新華每日電訊;2001年

5 暨南大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)研究開(kāi)發(fā)中心 鄭青博士后;抗菌肽 前景廣闊的新型抗生素[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

6 奇云;男性避孕藥物何時(shí)問(wèn)世[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

7 本報(bào)記者　薛冬　　通訊員　吳保平;生命科學(xué)在這里閃光[N];光明日?qǐng)?bào);2002年

8 本報(bào)記者 杜軍玲;建立自己的創(chuàng)新體系[N];人民政協(xié)報(bào);2002年

9 毛杰;神奇昆蟲(chóng)入菜入藥[N];北京科技報(bào);2003年

10 艾夫;我國(guó)棉花抗黃萎病研究獲重大成果[N];中國(guó)紡織報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄭洪遠(yuǎn);美洲花蜱對(duì)殺蟲(chóng)劑的毒理學(xué)和生理學(xué)反應(yīng)及長(zhǎng)角血蜱雄性特異性抗菌肽的基因克隆和特性分析[D];河北師范大學(xué);2012年

2 孫龍;兩種鞘翅目昆蟲(chóng)抗菌肽的分離純化與活性研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

3 丁云超;魚(yú)類卵黃高磷蛋白衍生抗菌肽的免疫調(diào)節(jié)功能的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2012年

4 枚春成（MAI XUAN THANH）;二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)抗菌肽的抗菌活性及特異性的影響[D];吉林大學(xué);2013年

5 王芳;高蛋白海洋解脂耶羅維亞酵母遺傳改良以及表達(dá)重組抗菌肽的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2011年

6 黃金豐;α-螺旋型膜活性多肽對(duì)不同細(xì)胞膜的構(gòu)效關(guān)系及作用機(jī)理研究[D];吉林大學(xué);2011年

7 溫武軍;鯉抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山東師范大學(xué);2011年

8 馮新;重組鱟素的規(guī)模化制備及其體內(nèi)外生物學(xué)效應(yīng)與作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2011年

9 肖向紅;微生物脅迫下東北林蛙皮膚抗菌肽和功能蛋白差異表達(dá)的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2012年

10 李麗;抗菌肽Abaecin制備及其對(duì)肉雞生長(zhǎng)及免疫影響的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李曉平;哈爾濱地區(qū)黑斑蛙（Rana nigromaculata）夏季皮膚抗菌肽多樣性的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

2 宋濤;奶牛血液紅細(xì)胞抗菌肽的分離與純化[D];河南科技學(xué)院;2010年

3 高飛;抗菌肽快速篩選方法與抗菌活性的研究[D];江南大學(xué);2011年

4 黃平;草魚(yú)腸道抗菌肽分離純化及部分理化性質(zhì)的研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2009年

5 梁蘇;一種高效克隆抗菌肽編碼基因的新方法[D];湖北大學(xué);2011年

6 潘朋朋;光滑爪蟾皮膚抗菌肽的分離純化及生物活性的鑒定[D];吉林大學(xué);2012年

7 譚娟娟;抗菌肽的構(gòu)效關(guān)系與活性機(jī)理的研究[D];吉林大學(xué);2012年

8 周世成;小麥蛋白抗菌肽的制備及其特性研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2011年

9 趙啟鳳;黑水虻抗菌肽誘導(dǎo)及粗提物活性研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2012年

10 谷素美;牛血白細(xì)胞抗菌肽的粗提取及防腐保藏功效檢測(cè)[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2806581