【摘要】：塑化劑、有機氯農(nóng)藥和多環(huán)芳烴雖然具有不同的物理化學(xué)性質(zhì),但都是在環(huán)境中廣泛存在的,對人類、其他生命體、財產(chǎn)和環(huán)境安全產(chǎn)生危害的一類有機污染物。在目前的研究中,主要使用人體生物個體監(jiān)測的方法對環(huán)境中有害物質(zhì)的內(nèi)暴露濃度進行評價。孕期胎兒是一類極為敏感的暴露對象,巴克假說提出在孕期暴露引起的影響可能導(dǎo)致出生后甚至成年期的負(fù)面健康效應(yīng),目前有部分研究報道了外源性有害物質(zhì)進入臍血循環(huán)的現(xiàn)象,而對其如何通過胎盤的轉(zhuǎn)運機制的研究仍十分缺乏。有害物質(zhì)進入胎血循環(huán)后,其中的內(nèi)分泌干擾物質(zhì)可能影響胎兒的下丘腦-垂體-性腺軸,進而影響胎兒發(fā)育過程中的內(nèi)分泌水平,調(diào)節(jié)內(nèi)源性激素的分泌量。因此,研究有害物質(zhì)的暴露水平,建立有效的人體生物個體監(jiān)測方法;研究胎兒暴露于有害物質(zhì)的水平和暴露機制,并進一步研究有害物質(zhì)對胎兒直接產(chǎn)生的健康效應(yīng),對于環(huán)境中的有害物質(zhì)健康風(fēng)險研究具有重要的科學(xué)意義和現(xiàn)實意義。本文主要研究結(jié)果如下:(1)建立了一種以人毛發(fā)為生物基質(zhì)的準(zhǔn)確定量檢測塑化劑生物標(biāo)志物的人體生物個體監(jiān)測方法,并進行了小試實驗。該方法符合歐洲藥物管理局的方法驗證指針要求的精密度和準(zhǔn)確度。能夠?qū)δ繕?biāo)待測的4種替代型塑化劑的11種生物標(biāo)志物中的10種進行準(zhǔn)確定量檢測。個體監(jiān)測小試實驗結(jié)果表明,與更親水的次級代謝物比較,較疏水性的初級單酯代謝物較易被檢出。表明頭發(fā)是一種具有較好的保留、儲存血液中的替代型塑化劑代謝物能力的基質(zhì),可以作為一種用于人體替代型塑化劑暴露評估的生物基質(zhì)。它在研究弱勢或難以取樣的人群(如新生兒和幼兒)暴露時具有較大的應(yīng)用價值。(2)擴展及驗證毛發(fā)中定量塑化劑的生物監(jiān)測方法,使其可以同時測定鄰苯二甲酸酯類塑化劑和替代型塑化劑的生物標(biāo)志物濃度,使用ICU院內(nèi)塑化劑暴露的患者頭發(fā)就進行分段監(jiān)測,發(fā)現(xiàn)暴露組患者頭發(fā)中生物標(biāo)志物濃度的變化隨暴露時間的增加而增加。其中鄰苯二甲酸單乙酯(1MEP,monoethyl Phthalate,),單(2-乙基已基)鄰苯二甲酸酯旨(MEHP,Mono(2-Ethylhexyl)Phthalate)和對苯二甲酸單(2-乙基已基)酯(MEHTP,Mono(2-Ethylhexyl)Terephthalate)可能與院內(nèi)暴露塑化劑有關(guān),其他塑化劑生物標(biāo)志物濃度可能與背景暴露有關(guān)。(3)在湖北省武漢市招募并選取了 79對母嬰的母靜脈血-臍血-胎盤樣品組,測定了成組樣品中典型有機氯農(nóng)藥的濃度、手性對映體分?jǐn)?shù),計算有機氯農(nóng)藥六六六同系物和滴滴涕及其代謝產(chǎn)物的跨胎盤轉(zhuǎn)運效率;討論參與者個人因素及社會學(xué)因素對暴露狀況和轉(zhuǎn)運效率的影響。發(fā)現(xiàn)有機氯農(nóng)藥在三種生物基質(zhì)中暴露水平脂重濃度母靜脈血臍血胎盤,其中β-HCH和p,p'-DDE為主要存在的污染物種類。研究中發(fā)現(xiàn)胎次和污染物濃度呈顯著負(fù)相關(guān);年齡等其他因素亦與污染物在體內(nèi)暴露狀況相關(guān),但相關(guān)并不普遍存在。研究中發(fā)現(xiàn)手性污染物α-HCH,o,p'-DDD和o,p'-DDT在三種生物樣品中均呈非外消旋。其中EFα-HCH0.5,EFo,p'-DDD0.5,EFo,p'-DDT0.5。有機氯農(nóng)藥六六六和滴滴涕呈現(xiàn)不同的跨胎盤轉(zhuǎn)運特征,六六六的Rcm1,而滴滴涕的Rcm≈1,不同污染物轉(zhuǎn)運效率上的差異可能與其物理化學(xué)性質(zhì)或具有不同的跨胎盤轉(zhuǎn)運機制有關(guān)。(4)結(jié)合六六六與滴滴涕跨胎盤轉(zhuǎn)運效率不同的結(jié)果上,應(yīng)用BeWo細(xì)胞構(gòu)建體外胎盤絨毛膜上皮細(xì)胞模型實驗對典型有機氯農(nóng)藥的跨胎盤轉(zhuǎn)運的機制進行了研究。發(fā)現(xiàn)六六六和滴滴涕在暴露實驗進行至180分鐘時達到濃度平衡,六六六表現(xiàn)出較滴滴涕高的AP-BL方向的表觀轉(zhuǎn)運效率;BL-AP方向表現(xiàn)出較AP-BL方向高的轉(zhuǎn)運效率;PDRDDTPDRHCH,代表HCH較難通過胎盤絨毛膜上皮細(xì)胞膜,與實際樣品實驗結(jié)果一致。轉(zhuǎn)運抑制實驗觀察到ATP-結(jié)合盒蛋白轉(zhuǎn)運蛋白族抑制劑和代謝抑制劑能夠顯著的降低OCP跨Be Wo細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運效率,證實OCP的跨胎盤轉(zhuǎn)運過程是多種轉(zhuǎn)運蛋白參與的主動運輸及親脂性物質(zhì)跨磷脂雙分子層被動擴散運輸?shù)慕Y(jié)果。(5)使用人體生物個體監(jiān)測方法測定了 109對從舟山市嵊泗群島招募的母嬰對臍帶血樣品中的多環(huán)芳烴類污染物的體內(nèi)暴露濃度,配合酶聯(lián)免疫吸附試驗定量性激素濃度水平,并研究兩者之間的相關(guān)性和可能影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)16種PAHs總濃度為164(IQR93.6-267)ng g-1脂重,其中主要成分為L-PAHs。膳食攝入途徑是研究人群的主要暴露途徑。臍帶血中16種PAHs的總濃度及H-PAHs濃度與潛在影響因素未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性;而L-PAHs與胎兒性別、胎次、孕期體重增加、流產(chǎn)次數(shù)及妊娠期具有顯著相關(guān);未發(fā)現(xiàn)潛在因素與性激素水平具有顯著相關(guān)性。多環(huán)芳烴暴露負(fù)調(diào)節(jié)臍血中E2和AMH水平,上調(diào)FSH水平。這種調(diào)節(jié)可能與孕期污染物暴露對胎兒HPG軸的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。
【圖文】：

應(yīng)監(jiān)測（ＭＲＭ）的離子對和質(zhì)譜儀器參數(shù)。逡逑數(shù)據(jù)采集使用動態(tài)多重反應(yīng)監(jiān)測（ｄＭＲＭ）模式進行。色譜程序為２５分鐘。該逡逑色譜方法能將具有相似的結(jié)構(gòu)和相同的ＭＲＭ離子對的ＤＥＨＴＰ的代謝物逡逑（ＭＥＨＴＰ和ＯＨ－ＭＥＨＴＰ）與ＤＥＨＰ的代謝物（ＭＥＨＰ和ＯＨ－ＭＥＨＰ）基線分離（如圖逡逑２．１嚴(yán)６］。然而，該方法不能分離Ｄ１ＤＰ和ＤＰＨＰ的代謝物。因此，ＤＰＨＰ代謝物逡逑的結(jié)果應(yīng)解釋為ＤＩＤＰ和ＤＰＨＰ的代謝物濃度的總和［３２］。色譜和質(zhì)譜設(shè)置和條件逡逑見表２．２和２．３。逡逑本實驗中使用范圍從０．１邋ｎｇ至７５邋ｎｇ的８點校準(zhǔn)曲線進行目標(biāo)生物標(biāo)志物的逡逑定量。校準(zhǔn)曲線的測定系數(shù)均大于０．９９。實驗中使用的信噪比（Ｓ／Ｎ）由Ａｇｉｌｅｎｔ逡逑ＭａｓｓｈｉｍｔｅｒＱＱＱ定量軟件計算，，該軟件使用目標(biāo)分析物的峰面積與在自動選擇逡逑的時間窗口（峰值前６０秒或峰值后３０秒）作為基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差或均方根計算。逡逑＊１０邋？逡逑３－７５＇邋＇一＂邐．邋．．邐逡逑

ＰＢＳ樣品同樣處理，作為對照組。結(jié)果表明，弱酸堿變性處理均顯著降低了邋ＡＰ逡逑代謝物的回收率。目標(biāo)分析物的回收率隨著酸（１１％－４５％）和堿性（１１％－８５％）變性逡逑而降低（圖２．２）。逡逑基于實驗結(jié)果，決定在萃取之前不適用毛發(fā)樣品消化步驟以避免降解目標(biāo)生逡逑物標(biāo)志物回收率。逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R99;X592


本文編號：2648349