本文選題：環(huán)氧化物水解酶 + β-受體阻滯劑　； 參考：《浙江工業(yè)大學》2010年碩士論文

【摘要】： 在環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌的篩選過程中,本文主要以間甲基苯基縮水甘油醚為底物,以高效液相為分析方法,獲得一株具有高活力、高對映立體選擇性的環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌。經(jīng)過鑒定為巨大芽孢桿菌命名為Bacillus megaterium ZJUZQ-002。 對Bacillus megaterium ZJUZQ-002進行發(fā)酵條件優(yōu)化。發(fā)現(xiàn)菌株生長過程中pH值和溫度對菌體的產(chǎn)量與環(huán)氧化物水解酶活力有重要影響。當發(fā)酵pH值為7.2左右,溫度為30℃時,菌體產(chǎn)量與酶活力均較好。底物誘導對該菌的酶活力也有重要的影響,當?shù)孜镎T導量為6 mmol/L時,所得菌的酶活力最好,當?shù)孜镎T導的濃度高于12 mmol/L時該菌基本不生長。 該菌產(chǎn)生環(huán)氧化物水解酶的最佳發(fā)酵條件為:蔗糖1.0 %,酵母膏1.0 %,NaCl 1.0 %, MgSO4·7H2O 5 mmol/L,K2HPO4·3H2O 0.3 %,KH2PO4 0.1 %,底物6 mmol/L,溫度:30℃,pH 7.2;250 mL三角瓶裝30 mL,轉(zhuǎn)速200 r/min,時間30 h。在該條件下酶活可達58.5 U/L。 對Bacillus megaterium ZJUZQ-002進行拆分條件,包括溫度、緩沖液pH、助溶劑類型、時間及催化劑與底物的質(zhì)量比等進行研究,并確定其最佳的拆分條件。緩沖液為pH 8.0、濃度為0.1 M的磷酸鉀(PKB),轉(zhuǎn)化溫度30℃,轉(zhuǎn)化時間16 h,助溶劑為DMSO,凍干細胞/底物(g/g) = 9/1,底物濃度為20 mmol/L;在該條件下底物的e.e.值為99.9 %,其E值為37。 對底物特異性的研究,發(fā)現(xiàn)菌體對鄰位和間位有甲基取代基的苯基縮水甘油醚類底物有較好的對映立體選擇性,并催化水解(R)-型的環(huán)氧化物,保留(S)-型;而對于對位有甲基取代基的苯基縮水甘油醚類底物立體選擇性稍差,且主要催化水解(S)-型的環(huán)氧化物,保留(R)-型;通過Docking研究已解釋了這一現(xiàn)象。在最適的轉(zhuǎn)化條件下,對反應(yīng)體系進行了擴大化轉(zhuǎn)化的研究,最終確定當體系放大到5倍時,對100 mmol的間甲基苯基縮水甘油醚進行轉(zhuǎn)化,16 h后底物的e.e.值接近100 %,轉(zhuǎn)化率為68.6 %;分離純化后進一步胺解可得光學純的β-受體阻滯劑類藥物:(S)-型托利洛爾,e.e.值98 %,得率16.5 %。
[Abstract]:In the screening process of epoxide hydrolase producing bacteria, a strain with high activity was obtained by using m-methylphenyl glycidyl ether as substrate and HPLC as the analytical method. High enantioselective epoxide hydrolase producing bacteria. Bacillus megaterium ZJUZQ-002 was identified as Bacillus megaterium. The fermentation conditions of Bacillus megaterium ZJUZQ-002 were optimized. It was found that pH and temperature had an important effect on the yield and the activity of epoxide hydrolase during the growth of the strain. When the fermentation pH was about 7.2 and the temperature was 30 鈩，

本文編號：2050859