發(fā)布時(shí)間：2021-08-01 11:57

　　本文基于核酸外切酶循環(huán)放大技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)血小板衍生因子（PDGF）和DNA等腫瘤標(biāo)志物高靈敏、高選擇性檢測(cè)檢測(cè)，并建立分子邏輯門體系。主要開(kāi)展了以下兩方面的工作：一、核酸外切酶級(jí)聯(lián)循環(huán)放大技術(shù)檢測(cè)血小板衍生因子本文建立了一種核酸外切酶級(jí)聯(lián)循環(huán)放大技術(shù)，基于血小板衍生因子（PDGF-BB）與其適體的特異性識(shí)別作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)PDGF-BB的化學(xué)發(fā)光免標(biāo)記高靈敏檢測(cè)。該體系由雙鏈DNA（核酸適體-受體）、兩種發(fā)卡結(jié)構(gòu)DNA分子，以及核酸外切酶組成。通過(guò)核酸適體與PDGF-BB的特異性識(shí)別并結(jié)合，運(yùn)用ExoIII對(duì)雙鏈結(jié)構(gòu)的特異性剪切，實(shí)現(xiàn)核酸外切酶級(jí)聯(lián)循環(huán)放大。反應(yīng)后釋放出大量的DNA酶，其與hemin結(jié)合形成辣根過(guò)氧化物DNA模擬酶（DNAzyme），采用luminol-H2O2化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系檢測(cè)，對(duì)PDGF-BB的檢測(cè)限可達(dá)6.8×10-13M。本方法設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件溫和且為均相反應(yīng)，免標(biāo)記成本低，效率高。對(duì)于具有適體序列的生物分子具有廣泛適用性。二、核酸外切酶循環(huán)放大技術(shù)檢測(cè)DNA及其在分子邏輯門體系中的應(yīng)用研究基于核酸外切酶循環(huán)放大技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA的高靈敏檢測(cè)，并用于分子邏輯門... 

【文章來(lái)源】：青島科技大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Exo-CARA法（循環(huán)IIIIIIII）免標(biāo)記化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PDGF-BB的原理圖

進(jìn)而激活Recycle II。即， locker DNA與MB1的3'端互Exo III識(shí)別雙鏈結(jié)構(gòu)，進(jìn)而發(fā)生剪切作用。當(dāng)剪切完兩條鏈，其中一條鏈就是blocker DNA，其繼續(xù)與MNA的循環(huán)，稱這個(gè)循環(huán)過(guò)程稱為Recycle II，blocker這個(gè)循環(huán)中釋放的另一條鏈命名它為鏈A，其作為，當(dāng)鏈A與MB2的3'端互補(bǔ)結(jié)合，進(jìn)而發(fā)生ExoIII的剪先前的結(jié)構(gòu)分裂成兩條鏈，其中一條鏈就是鏈A，其，稱這個(gè)循環(huán)為Recycle III。這個(gè)循環(huán)中釋放的另一blocker DNA序列，從而引發(fā)Recycle II。如此，三個(gè)B不斷的積累。當(dāng)反應(yīng)完畢后，鏈A和鏈B中的DNAz合，形成HRP模擬酶，采用Luminol-H2O2化學(xué)發(fā)光體發(fā)光信號(hào)。量對(duì)實(shí)驗(yàn)體系影響的研究

后分別檢測(cè)各用量下的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，以此確定Exo如圖2-2所示，在Exo III的用量在0~100U之間變化，度隨著Exo III用量的增加而增加，當(dāng)酶用量大于50U著酶用量而增加。因此，選擇50 U作為最佳Exo III用時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)體系影響的研究時(shí)間是影響Luminol-H2O2-DNAzyme化學(xué)發(fā)光體系的Exo III反應(yīng)時(shí)間為 10 min，20 min，30 min，45 m別檢測(cè)不同時(shí)間下的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，以此來(lái)確定Ex影響。如圖2-3所示，體系的反應(yīng)時(shí)間在0~90 min之時(shí)，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度隨著時(shí)間的增強(qiáng)而增強(qiáng)，而當(dāng)時(shí)間強(qiáng)度的變化就很不明顯，因此，選擇30 min作為體系

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3315483