本文關鍵詞：生物檢材DNA堿性裂解提取法的優(yōu)化與改良

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【摘要】：目的通過對DNA堿性裂解提取法進行優(yōu)化和改進,建立一種操作更簡便、檢驗快速、結果更可靠的生物檢材DNA提取方法。方法以抗凝血作為檢驗樣本,通過改變提取試劑的濃度、pH值、保存時間及孵化樣本的溫度、時間等條件,觀測對檢驗結果峰值的影響,以確定提取試劑最佳條件,DNA提取物最佳保存條件。通過用改良后的堿性裂解法及Chelex100法同時提取不同量的抗凝血樣本、各類法醫(yī)生物檢材,用不同廠家的DNA試劑盒擴增,對堿性裂解法的靈敏度、適應性和適用性進行評估。結果改良后的堿性裂解法只需將生物檢材用NaOH(0.25mol/L)99℃孵化8min,振蕩后加入TrisHCl(0.05mol/L,pH=6.5)中和液,離心后直接擴增檢測。DNA提取物于-20℃冰箱可長期保存。對于毛發(fā)及精斑類檢材優(yōu)于Chelex100法。DNA提取物適用于現(xiàn)有各種DNA試劑盒擴增檢測,其靈敏度與Chelex100法相似。結論改良后的堿性裂解法,操作簡便、檢驗快速、結果可靠,可適合于法庭科學的檢案與建庫。
【作者單位】： 河北省公安廳;公安部物證鑒定中心;寧夏自治區(qū)公安廳;
【關鍵詞】： 法醫(yī)物證學 堿性裂解法 DNA提取 Chelex
【分類號】：D919
【正文快照】： 1996年Dissing博士首次將廣泛應用于細菌提取中國法醫(yī)學雜志CHIN J FORENSIC MED 2011年第26卷第4期士[2]、劉翠蘭[3]及鄭秀芬[4]等對上述堿性裂解法進行了改進及補充。但上述報導的方法針對不同類型的法醫(yī)生物檢材,其相對應的提取方法(孵化的溫度及時間)各不相同,不能使不同

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本文編號：648436