發(fā)布時(shí)間：2020-02-27 03:07

【摘要】：目的:本文擬對(duì)簡(jiǎn)并寡核苷酸引物PCR(DOP)和擴(kuò)增前引物延伸(PEP)兩種全基因組擴(kuò)增技術(shù)在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討,對(duì)其應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)實(shí)踐的可行性進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)。 方法:對(duì)兩種全基因組擴(kuò)增(WGA)技術(shù)中可能出現(xiàn)STR滑脫現(xiàn)象的影響因素進(jìn)行研究,然后在控制這些滑脫影響因素的基礎(chǔ)上建立穩(wěn)定可靠的技術(shù)方案;將該技術(shù)方案應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)的單基因座擴(kuò)增聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染檢測(cè)系統(tǒng)、多色熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)以檢驗(yàn)兩種技術(shù)應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)常用STR基因座的可靠性;將該技術(shù)應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)常見(jiàn)微量檢材單根毛發(fā)和指紋的DNA分析,對(duì)其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行評(píng)估。 結(jié)果:初步建立了基于DOP技術(shù)的STR滑脫機(jī)制模型,對(duì)WGA技術(shù)中可能導(dǎo)致STR滑脫現(xiàn)象的影響因素得到了解和闡述;在控制WGA技術(shù)中可能導(dǎo)致滑脫現(xiàn)象發(fā)生的影響因素的基礎(chǔ)上,通過(guò)優(yōu)化組合,建立了可靠穩(wěn)定的PEP和DOP兩種WGA技術(shù)方案;兩種技術(shù)方案應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)單基因座STR分析和STR復(fù)合擴(kuò)增分析,均獲得了滿意的分析結(jié)果;建立了通過(guò)顯微操作捕獲細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)
【圖文】：

第一部分建立STR滑脫模型的初步研究結(jié)果3結(jié)果3.1全基因組擴(kuò)增以普通TaqDNA聚合酶催化，產(chǎn)物進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)當(dāng)全基因組擴(kuò)增的初始DNA模板量稀釋到一定程度時(shí)，在DOP法擴(kuò)增的樣本中出現(xiàn)滑脫現(xiàn)象。當(dāng)初始DNA濃度大于.025ng時(shí)，分型結(jié)果準(zhǔn)確，在0.125ng時(shí)部分基因座分型區(qū)出現(xiàn)了新的條帶，在稀釋到0.025ng則不能檢測(cè)到。經(jīng)測(cè)序證實(shí)，此新出現(xiàn)的條帶為新的STR等位基因，即出現(xiàn)了滑脫。此現(xiàn)象在所觀察的PEP法中均沒(méi)觀察到。

.3滑脫現(xiàn)象發(fā)生的規(guī)律圖1一3.D3s1358基因座擴(kuò)增結(jié)果:滑脫現(xiàn)象發(fā)生的規(guī)律分別以常規(guī)量模板(l一2.ns，g左al~sa)和以初始NDA模板量0.125ng經(jīng)Dop法擴(kuò)增的產(chǎn)物為模板(右bl一b5)、協(xié)醉1:用量6tll進(jìn)行同一次擴(kuò)增。抽為分型ALDDER;NC為陰性對(duì)照，，1一5為5個(gè)不同樣本，相同數(shù)字為來(lái)自同一個(gè)體.由圖可見(jiàn):在純合子和相差一個(gè)及三個(gè)以上(含三個(gè))重復(fù)單位的雜合子中均未觀察到滑脫現(xiàn)象，而在3和4號(hào)兩個(gè)兩等位基因相差兩個(gè)重復(fù)單位的雜合子樣本中觀察到滑脫現(xiàn)象的產(chǎn)生。由此說(shuō)明:本體系中滑脫只見(jiàn)于兩等位基因相差兩個(gè)重復(fù)單位的雜合子。
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：D919

【引證文獻(xiàn)】

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1 鄧建強(qiáng);劉寶琴;蔡繼峰;李文慧;龍仁;侯一平;;兩種全基因組擴(kuò)增技術(shù)對(duì)單根毛發(fā)DNA檢驗(yàn)效能的研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2012年04期

本文編號(hào)：2583165