【摘要】： 目的： 為提高線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)遺傳標(biāo)記的個(gè)人識(shí)別能力和非母排除能力，篩選線粒體DNA編碼區(qū)頻率較好的單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphism SNP)基因座，利用復(fù)合MS-PCR(multiplexed mutagenically separated PCR)技術(shù)、銀染分型，建立線粒體DNA編碼區(qū)10個(gè)SNP基因座復(fù)合擴(kuò)增分型系統(tǒng)，以期為法醫(yī)鑒定提供mtDNA-SNP新的遺傳標(biāo)記和新的檢測(cè)手段，并探討其應(yīng)用價(jià)值；同時(shí)調(diào)查160例中國(guó)成都無(wú)關(guān)漢族個(gè)體mtDNA編碼區(qū)10個(gè)SNP基因座等位基因頻率和單倍型分布情況，為群體遺傳學(xué)提供新的數(shù)據(jù)。 方法： 從線粒體DNA編碼區(qū)篩選多態(tài)性較好的10個(gè)SNP(T12705C，G8701A，A8584G，T10400C，T4883C，C10873T，A15301G，C14783T，A3010G，A5460G)基因座。針對(duì)每個(gè)SNP基因座分別設(shè)計(jì)兩條片段相差3～4個(gè)堿基的等位基因特異性引物和一條公共引物，優(yōu)化擴(kuò)增條件，使10個(gè)SNP基因座同時(shí)在一管中擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染顯帶后分析樣本的基因型。應(yīng)用直接測(cè)序技術(shù)以T12705C、C10873T和A5460G基因座為例研究該方法檢測(cè)的準(zhǔn)確性。 結(jié)果： 本研究成功建立了10個(gè)mtDNA-SNP基因座復(fù)合擴(kuò)增，聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染顯帶分型的方法；不同SNP基因座為長(zhǎng)度不同的單一譜帶，其分型結(jié)果與直接測(cè)序一致；用上述方法對(duì)成都漢族160名無(wú)關(guān)個(gè)體10個(gè)mtDNA-SNP基因座進(jìn)行了準(zhǔn)確分型，分型結(jié)果可靠，重復(fù)性好。10個(gè)mtDNA-SNP基因座C12705T、A8701G、G8584A、C10400T，，T4883C、C10873T、A15301G、C14783T、A3010G、A5460G等位基因頻率分別為0．382／0．618、0．482／0．518、0．825／0．175、0．494／0．506、0．169／0．831、0．513／0．487、0．538／0．462、0．506／0．494、0．163／0．837、0．09／0．91，共檢出18種單倍型，單倍型的基因多樣性為0．8617，偶合概率值為0．1437。 結(jié)論： 本研究通過(guò)自行設(shè)計(jì)的10套引物，成功的構(gòu)建了10個(gè)線粒體SNP基因座復(fù)合MS-PCR擴(kuò)增、銀染分型體系。為提高mtDNA-SNP基因座的個(gè)人識(shí)別能力和非母排除能力提供了一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、有效的SNP分型新方法；對(duì)建立線粒體DNA-SNP數(shù)據(jù)庫(kù)，為線粒體SNP基因座在考古學(xué)、進(jìn)化學(xué)和法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親子鑒定提供了方法學(xué)和群體遺傳學(xué)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to improve the ability of individual identification and non-maternal exclusion of mitochondrial DNA (mitochondrial DNA,mtDNA (mtDNA) markers, and to screen single nucleotide polymorphic (single nucleotide polymorphism SNP) loci with better frequency of mitochondrial DNA coding region. A multiplex amplification typing system for 10 SNP loci of mitochondrial DNA coding region was established by using compound MS-PCR (multiplexed mutagenically separated PCR) technique and silver staining typing, in order to provide a new mtDNA-SNP genetic marker and a new detection method for forensic identification. And discusses its application value; The alleles frequency and haplotype distribution of 10 SNP loci in the mtDNA coding region of 160 unrelated Han individuals in Chengdu, China, were also investigated in order to provide new data for population genetics. Methods: ten polymorphic SNP loci (T12705CnG8701A, T10400CnT4883T10873T10873TC14783TC14783TFA3010GnA5460G) were screened from the mitochondrial DNA coding region. Two allele-specific primers and one common primer were designed for each SNP locus. The amplification conditions were optimized, and 10 SNP loci were amplified in one tube at the same time. The PCR products were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis and silver staining. The accuracy of this method was studied by using direct sequencing technique with T12705CnC10873T and A5460G loci as examples. Results: ten mtDNA-SNP loci were successfully amplified, polyacrylamide gel electrophoresis and silver staining banding. Different SNP loci were single bands of different length, and the typing results were consistent with direct sequencing. Using the above method, 10 mtDNA-SNP loci of 160 unrelated individuals in Chengdu Han nationality were accurately typed. The results of typing were reliable and reproducible. Ten mtDNA-SNP loci C12705TnA8701GGN G8584AC10400 T10400 T10883 C10873TUA15301GC14783TA3010G, C14783TA3010G. The allele frequency of A5460G is 0.382 / 0.618 / 0.482 / 0.518 / 0.825 / 0.175 / 0.494 / 0.506n 0.169r0.831 / 0.5130.538 / 0.462n 0.506 / 0.494r0.1630.163 / 0.830.09 / 0.991, respectively. A total of 18 haplotypes were identified. The genetic diversity of haplotypes was 0.8617 and the probability of coupling was 0.1437. Conclusion: in this study, 10 mtDNA loci were successfully amplified by 10 sets of primers designed by ourselves, and the silver staining typing system was constructed. It provides a simple, rapid, accurate, economical and effective method for SNP typing in order to improve the ability of individual recognition and non-maternal exclusion of mtDNA-SNP loci. The establishment of mitochondrial DNA-SNP database provides methodology and population genetic basis for mitochondrial SNP locus identification in archaeology, advanced chemistry and forensic medicine.
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：D919

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高鵬;張志茹;杜丹華;吳江;;NOS1基因多態(tài)性與腔隙性腦梗死相關(guān)性研究[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2011年08期

2 曹黨恩;賀國(guó)洋;魯霞;;白細(xì)胞介素-8-251A/T多態(tài)性與宮頸癌的相關(guān)性[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

3 馮紅波;師廣勇;;基質(zhì)金屬蛋自酶-1基因單核苷酸多態(tài)性與喉癌的相關(guān)性研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)工程;2011年06期

4 胡海芳;王燕;張華;譚國(guó)萍;向陽(yáng)冰;;維吾爾族CD14基因單核苷酸多態(tài)性和遺傳結(jié)構(gòu)分析[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年16期

5 趙健全;施敏敏;謝俊杰;金佳斌;沈柏用;鄧俠興;詹茜;彭承宏;陳皓;;Toll樣受體2基因單核苷酸多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易感性的關(guān)系[J];外科理論與實(shí)踐;2011年04期

6 劉二平;韓立影;方琪;秦正紅;王進(jìn);;鮭魚精DNA提高人工突變質(zhì)粒模板中單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)識(shí)別的特異性及其應(yīng)用[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年03期

7 李田英;黃婉嫻;王龍宇;崔毅峙;李欣;楊學(xué)習(xí);;BRCA1基因單核苷酸多態(tài)性與廣東漢族女性散發(fā)性乳腺癌易感相關(guān)性研究[J];分子診斷與治療雜志;2011年05期

8 陳軍;趙斌;陳煜森;;GAS6基因344-35C/T多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性研究[J];中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐;2011年08期

9 袁迎第;謝利劍;黃敏;方_g聃;趙鵬軍;張帆;;漢族兒童擴(kuò)張型心肌病與LMNA基因的相關(guān)性研究[J];臨床兒科雜志;2011年06期

10 鮑會(huì)靜;劉運(yùn)德;楊立順;;小分子RNA在心腦血管疾病中作用的研究進(jìn)展[J];實(shí)用心腦肺血管病雜志;2011年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 武淑蘭;李淵;;DNMT3B基因啟動(dòng)子-149位單核苷酸多態(tài)性與急性白血病的關(guān)系[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

2 鄭涓;;SIRT1單核苷酸多態(tài)性與中國(guó)武漢地區(qū)漢族人群超重的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 高英堂;劉娟娟;杜智;王偉麗;劉彤;王毅軍;楊斌;;IL-10、ALDH2單核苷酸多態(tài)性與肝病的相關(guān)性研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

4 周慶輝;王金花;黃秀峰;林朝文;楊園園;吳聯(lián)滔;吳玉梅;;MMP14基因單核苷酸多態(tài)性在廣西百色地區(qū)壯族人群中的分布[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

5 劉娟娟;高英堂;杜智;楊斌;經(jīng)翔;王毅軍;王鳳梅;劉彤;;IL-10基因啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性與HBV感染后疾病轉(zhuǎn)歸的研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第30次學(xué)術(shù)年會(huì)暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

6 郝萍;金艷花;楊康鵑;;KCNJ11基因單核苷酸多態(tài)性與胰島素分泌異常(英文)[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

7 王金花;黃秀峰;周慶輝;林朝文;楊園園;韋葉生;黃昌盛;吳聯(lián)滔;吳玉梅;何蘭鳳;;廣西百色地區(qū)壯族婦女脂聯(lián)素基因單核苷酸多態(tài)性與骨密度的關(guān)系研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

8 克丙申;張勝蘭;邢萬(wàn)佳;黃象艷;周仲玲;徐軍;齊發(fā)蓮;;中國(guó)人(山東地區(qū))HLA-DPB1基因單核苷酸多態(tài)性的初步研究[A];山東免疫學(xué)會(huì)、山東微生物學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2001年

9 王海振;郝萍;李迪;王偉杰;咸哲民;樸禹;金雄吉;崔正偉;楊康鵑;;KCNJ11基因單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病關(guān)系的研究[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

10 彭霞;陳海炎;雷明明;張細(xì)權(quán);;雞IGF-Ⅰ基因單核苷酸多態(tài)性與生產(chǎn)性能的相關(guān)分析[A];第十次全國(guó)畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 張荔子;我國(guó)啟動(dòng)人類單核苷酸多態(tài)性研究[N];健康報(bào);2000年

2 記者 游雪靖;我國(guó)啟動(dòng)人類單核苷酸多態(tài)性研究計(jì)劃[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 吳志軍;單核苷酸多態(tài)性影響乙肝慢性化[N];健康報(bào);2004年

4 麥國(guó)榮;單核苷酸多態(tài)性與個(gè)體化用藥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

5 ;兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡中白細(xì)胞介素－10啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性對(duì)自身表達(dá)水平的影響[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

6 李山;三個(gè)與冠心病有關(guān)的基因得到確認(rèn)[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

7 張?zhí)锟?非洲人其實(shí)比亞歐人更強(qiáng)健長(zhǎng)壽[N];大眾科技報(bào);2010年

8 白云;生物和信息技術(shù)“手牽手”[N];中國(guó)社會(huì)科學(xué)院院報(bào);2003年

9 ;基因變異圖譜：生命科學(xué)又一次進(jìn)軍[N];云南科技報(bào);2001年

10 張?zhí)锟?美洲人起源問(wèn)題新發(fā)現(xiàn)[N];南方周末;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 余自強(qiáng);抗血小板膠原受體糖蛋白VI單克隆抗體的制備和功能研究[D];蘇州大學(xué);2005年

2 史麗;人類CYP2A13基因SNPs及其與喉、咽、鼻惡性腫瘤危險(xiǎn)性的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2005年

3 劉麗波;精神分裂癥相關(guān)基因的遺傳學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2006年

4 汪穎;單體型和基因型問(wèn)題的優(yōu)化模型和算法[D];大連理工大學(xué);2007年

5 劉洋;ACSL基因家族與精神分裂癥的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2008年

6 富強(qiáng);膽囊收縮素A受體基因的多態(tài)性與偏執(zhí)型精神分裂癥的關(guān)系[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

7 羅培芬;多巴胺D2受體基因多態(tài)性與偏執(zhí)型精神分裂癥的關(guān)聯(lián)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 季從亮;雞肉IMP含量相關(guān)候選基因SNP篩查及其用于地方雞種群體遺傳結(jié)構(gòu)分析的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2005年

9 李會(huì)晨;遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌的分子遺傳及臨床病理研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 李艷蕓;HLA-DRB1基因編碼區(qū)SNPs的分析及其與宮頸癌的相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 呂納強(qiáng);HLA-DQ基因與大動(dòng)脈炎[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

2 吳水晶;β防御素1基因啟動(dòng)子區(qū)域-688G/C單核苷酸多態(tài)性與重癥膿毒癥發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究[D];浙江大學(xué);2008年

3 王丹妮;COMT基因遺傳多態(tài)性與漢族人白癜風(fēng)易感性關(guān)聯(lián)分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張來(lái)軍;Oligophrenin-1基因單核苷酸多態(tài)性與秦巴山區(qū)智力及精神發(fā)育遲滯的關(guān)聯(lián)分析[D];西北大學(xué);2005年

5 李培凱;5-HT1B受體基因G861C、A-161T位點(diǎn)多態(tài)性與基諾族酒依賴相關(guān)性研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

6 余興華;生長(zhǎng)激素受體基因單核苷酸多態(tài)性在下頜前突與正常下頜人群中的分布比較[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

7 邢麗麗;MMP9和COX2基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

8 宋新建;PRKCH基因單核苷酸多態(tài)性與腦梗死遺傳易患性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

9 周偉;單體型組裝加權(quán)最小字符翻轉(zhuǎn)問(wèn)題參數(shù)化算法研究[D];中南大學(xué);2008年

10 羅振宇;BSEP基因多態(tài)性與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的相關(guān)性研究[D];南昌大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2417706