發(fā)布時間：2018-06-01 22:32

  本文選題：線粒體DNA + 異質性��； 參考：《山西醫(yī)科大學》2006年碩士論文

【摘要】：目的：建立變性高效液相色譜法(DHPLC)快速篩選同一個體不同組織線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)高變區(qū)異質型的方法；同時采用直接測序法驗證其發(fā)生的頻率，為利用mtDNA進行法醫(yī)學鑒定時作出更加合理的結果解釋提供參考。 方法：收集尸體18例，，分別提取血、心肌、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰腺、腦組織、肌肉、皮膚、肋骨、指甲及毛發(fā)的mtDNA，共制備樣本234份；并且在本實驗室選取三個已知序列的樣本Y1、Y2和Y3。在高變區(qū)選取兩個多態(tài)性較好的區(qū)域即HV Ⅰ：nt16159-16391和HV Ⅱ：nt172-408，選用Gold~(TM) DNA聚合酶分別進行擴增并且優(yōu)化擴增條件。用已知序列的樣本建立兩個區(qū)域各自最佳的DHPLC檢測條件；采用DHPLC圖譜和直接正反向測序法均相同的1#個體的所有樣本建立篩選不同組織間異質型的模型。利用DHPLC篩選異質型樣本，篩選出的異質型樣本擴增更長的片段(包含目的片段)用ABI 310遺傳分析儀進行正反向測序驗證。 結果：DHPLC的最佳檢測溫度是HV Ⅰ：59.2℃，HV Ⅱ：55℃。DHPLC共篩選出11例個體具有異質性，而直接測序法驗證只有9例個體具有異質性，其中有4例為點異質型，6例為長度異質型，有1例既有點異質型又有長度異質型。觀察到異質型的個體中有4例每個個體的所有樣本均在相同的位置出現(xiàn)了相同的異質型；有2例出現(xiàn)了兩個堿基位置發(fā)生異質性的情況。各種組織出現(xiàn)異質型的頻率不完全相同，其范圍在27.8％-44.4％之間，其中肌肉組織出現(xiàn)的異質性頻率最高。在所檢出的異質性位點中，nt16184-16193和nt303-309的頻率最高。 結論：DHPLC可快速篩選異質性，且經(jīng)濟、靈敏、自動化程度高。隨著篩選技術和測序技術的不斷發(fā)展，在mtDNA可檢出的異質型越來越多，這增加了利用mtDNA進行法醫(yī)學鑒定中結果解釋的難度。因此在法醫(yī)學應用領域必須擴大mtDNA的檢測范圍以增加個體識別能力。
[Abstract]:Objective: to establish a rapid method for screening the heterotypes of mitochondrial DNA(mitochondrial mtDNAs in different tissues of the same body by denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC), and to verify the frequency of its occurrence by direct sequencing. To provide a reference for the use of mtDNA forensic identification to provide a more reasonable interpretation of the results. Methods: the mtDNAs of blood, myocardium, liver, spleen, lung, kidney, pancreas, brain, muscle, skin, rib, nail and hair were collected from 18 cadavers. And the samples of three known sequences, Y1, Y2 and Y3, were selected in our laboratory. Two polymorphic regions, HV 鈪

本文編號：1965968