本文關(guān)鍵詞： 法醫(yī)學(xué) DNA分型 短串聯(lián)重復(fù)序列(STR) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 復(fù)合擴(kuò)增 熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳熒光檢測自動(dòng)分析法 群體遺傳學(xué)　出處：《四川大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的本課題旨在建立已有群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)的STR基因座D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。按照美國DNA分析方法技術(shù)工作組(The Technology Working Group on DNA Analysis Methods，TWGDAM)的指導(dǎo)方案進(jìn)行法醫(yī)學(xué)實(shí)用性研究。方法要首先對(duì)多個(gè)本實(shí)驗(yàn)室做過群體遺傳學(xué)研究的STR基因座進(jìn)行篩選，從中獲得四個(gè)多態(tài)性好、個(gè)人識(shí)別機(jī)率高，擴(kuò)增產(chǎn)物長度片段有區(qū)別的四個(gè)STR基因座，即D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426，利用傳統(tǒng)的復(fù)合擴(kuò)增方法，ABI-310毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的研究。并對(duì)復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度和準(zhǔn)確度，不同擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)和熱啟動(dòng)下復(fù)合擴(kuò)增的效果等進(jìn)行了研究。按照TWGDAM指導(dǎo)方案的基本要求，對(duì)該體系進(jìn)行了法醫(yī)學(xué)實(shí)用性研究，包括基因座的種屬特異性，組織同一性及可重復(fù)性。結(jié)果成功建立了D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。而且，這一擴(kuò)增體系條件易于優(yōu)化，采用國產(chǎn)Taq酶，不需要熱啟動(dòng)進(jìn)行擴(kuò)增，即可得到滿意的擴(kuò)增產(chǎn)物和分型結(jié)果。相對(duì)于國外昂貴的試劑盒，是一種成本低廉但效率高的STR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究表明，，該體系的檢測靈敏度為0.25ng模板DNA，四個(gè)STR基因座具有較高的種屬特異性，對(duì)同一個(gè)體的不同組織檢測結(jié)果一致，對(duì)常見基質(zhì)上的檢材及混合樣本具有檢測能力。對(duì)15個(gè)實(shí)際檢案樣本的檢測證明，該體系能用于法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定。結(jié)論D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系可應(yīng)用ABI-310檢測平臺(tái)，獲得可靠的分型結(jié)果。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究證明，該體系擴(kuò)增條件易于優(yōu)化、成本低廉、分型結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度和準(zhǔn)確度高，種屬特異性好，重復(fù)性好，對(duì)陳舊斑痕具有檢測能力，能夠?qū)ΤＲ娀|(zhì)上的斑痕以及混合斑痕正確分型，與常見的動(dòng)物及微生物無交叉反應(yīng)，可以應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)實(shí)際檢案。
[Abstract]:Objective to establish a STR locus D11S4951 and D7S3062 with population genetic data. Fluorescent multiplex amplification system for GATA168F06 and D10S1426 loci. Technical working Group on DNA Analysis in the United States (. The Technology Working Group on DNA Analysis Methods. The guidance program of TWGDAM was used to study the practicability of forensic medicine. Methods STR loci which had been studied in population genetics in our laboratory were screened and four polymorphisms were obtained. There were four STR loci with different length fragments of the amplified products, D11S4951, D7S3062, GATA168F06 and D10S1426. The conventional multiplex amplification method (ABI-310 capillary electrophoresis instrument) was used to study the fluorescence labeling multiplex amplification. The sensitivity and accuracy of the multiplex amplification system were also studied. The effects of multiple amplification under different amplification cycles and hot start were studied. According to the basic requirements of TWGDAM guidance scheme, the practicability of forensic medicine was studied. The results showed that D11S4951D7S3062 was successfully established. GATA168F06 and D10S1426 multiplex amplification system, and this amplification system conditions are easy to optimize, using domestic Taq enzyme, without the need for hot start to amplify. Satisfactory amplification products and typing results can be obtained. Compared with expensive foreign kits, it is a low cost but high efficiency STR locus complex amplification system. Forensic application studies show that. The sensitivity of the system is 0.25 ng template DNA. The four STR loci have higher species-specificity, and the results are consistent for different tissues of the same individual. This system can be used in personal identification and paternity identification of forensic medicine. Conclusion D11S4951. The fluorescent multiplex amplification system of D7S3062Gata 168F06 and D10S1426 can be detected by ABI-310. The results of forensic application showed that the system was easy to optimize, low cost, stable typing results, high sensitivity and accuracy, good species specificity, good reproducibility. It has the ability to detect the old marks, can correctly type the stains and mixed stains on common substrates, and has no cross reaction with common animals and microorganisms, so it can be used in forensic medical practice.
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：D919

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本文編號(hào)：1482502