為探索花生NBS-LRR類基因在花生抗病中的分子作用機(jī)制,本研究以花生品種‘Z525’為試驗(yàn)材料,采用電子克隆與RT-PCR相結(jié)合的方法,克隆了花生葉片中的P9基因。結(jié)果表明,獲得一個(gè)長度為3557 bp的序列,該序列包含一個(gè)完整的開放閱讀框(ORF),ORF的長度為3 195 bp (93 bp～3 287 bp),編碼1 064個(gè)氨基酸(120.4 kD),等電點(diǎn)pI為5.92。序列分析表明,該基因編碼的蛋白與花生中假定的抗性蛋白R(shí)PP13-like及花生二倍體野生種Arachis duranensis和Arachis ipaensis推測(cè)的抗病蛋白At3g14460、RPP13-like高度相似;P9蛋白屬于NBS-LRR家族,具有典型的NB-ARC和LRR-3兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域,推測(cè)該基因參與花生抗病調(diào)控過程。蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)表明該基因編碼的蛋白主要位于葉綠體中,可能少量分布于細(xì)胞核中,推測(cè)該基因可能主要作為葉綠體蛋白參與細(xì)胞的抗氧化、抗衰老等抗逆過程,其次作為轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。本研究克隆了P9基因的全長cDNA序列,并對(duì)該基因序列、結(jié)構(gòu)和功能等方面進(jìn)行了分析,為進(jìn)一步...

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圖1 引物對(duì)P9-F/P9-R擴(kuò)增c DNA的電泳

利用NCBI上的Conserveddomainsearch工具分析編碼1064個(gè)氨基酸殘基的蛋白，結(jié)果表明該蛋白屬于NBS-LRR家族，具有典型的NB-ARC和LRR-3兩個(gè)保守功能區(qū)域，同時(shí)具有9個(gè)亮氨酸富集重復(fù)(leucine-richrepeat,LRR)結(jié)構(gòu)域(圖....

圖3 P9蛋白親疏水性分析

SignalP4.1服務(wù)器預(yù)測(cè)該蛋白的信號(hào)肽剪切位點(diǎn)結(jié)果表明(圖4),P9蛋白第34位的賴氨酸殘基具有最高的剪切點(diǎn)分值0.233，位于第4位的丙氨酸殘基具有最大的信號(hào)肽分值0.408，第21位的精氨酸殘基具有最高的結(jié)合剪切位點(diǎn)分值0.229。由于信號(hào)肽的平均值為0.269(小于....

圖4 P9信號(hào)肽預(yù)測(cè)

圖3P9蛋白親疏水性分析蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)表明，該蛋白被定位于葉綠體、細(xì)胞核和過氧化物酶體的概率分別為78.3%、17.4%和4.3%，說明該蛋白主要被定位于葉綠體中，細(xì)胞核中可能也有少量的分布。

圖2 P9蛋白保守結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)

GOR在線軟件預(yù)測(cè)P9蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明該P(yáng)9蛋白主要由無規(guī)則卷曲(c)、α螺旋(h)和β折疊(e)構(gòu)成，其中無規(guī)則卷曲比例最高為46.15%，其次是α螺旋(38.53)和β折疊(15.32%)(圖5)。使用ProtFun2.2軟件分析該蛋白的功能結(jié)合亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果....

本文編號(hào)：4017009