發(fā)布時(shí)間：2024-04-20 03:30

　　旨在構(gòu)建敖漢細(xì)毛羊BMP6、BMPR1B基因的過表達(dá)載體,而后將其導(dǎo)入成纖維細(xì)胞,分析轉(zhuǎn)染后兩基因mRNA、蛋白表達(dá)量的變化及基因間相互作用對(duì)毛囊的影響。選擇40日齡敖漢細(xì)毛羊胎羊,采集組織樣品,提取RNA后反轉(zhuǎn)錄成cDNA,通過PCR反應(yīng)后利用SoSo試劑盒將純化的目的片段與表達(dá)載體pcDNA3.1連接。酶切鑒定正確后,轉(zhuǎn)至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,振蕩培養(yǎng)并挑取單菌落擴(kuò)大培養(yǎng)。提取質(zhì)粒后將pcDNA3.1-BMP6、pcDNA3.1-BMPR1B單、共轉(zhuǎn)染至成纖維細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染后測(cè)定表達(dá)量的變化并探究兩基因間的作用關(guān)系。結(jié)果表明,共轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞后BMPR1B基因及BMPR1B蛋白的表達(dá)量均較單轉(zhuǎn)染組極顯著升高(P<0.01),而BMP6基因及BMP6蛋白的表達(dá)量與單轉(zhuǎn)染組無顯著差異(P>0.05)。因此,BMP6基因促進(jìn)了BMPR1B基因的表達(dá),BMPR1B基因?qū)MP6基因的表達(dá)幾乎沒影響。

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【部分圖文】：

圖1目的基因PCR擴(kuò)增

圖1為PCR后凝膠電泳分析結(jié)果,擴(kuò)增條帶單一明亮,大小分別位于537,1509bp處,與已知大小相符。2.2pcDNA3.1載體單酶切及純化

圖2pcDNA3.1表達(dá)載體單酶切

酶切結(jié)果如圖2所示,pcDNA3.1載體為大小5428bp,圖中條帶與其大小所吻合,可用于后期的試驗(yàn)。2.3表達(dá)載體pcDNA3.1與目的片段重組及鑒定

圖3菌液PCR擴(kuò)增

菌液PCR電泳結(jié)果如圖3,擴(kuò)增條帶單一明亮,位于537,1509bp處,分別為BMP6、BMPR1B基因。菌液測(cè)序后用Blast比對(duì),經(jīng)測(cè)序比對(duì)后堿基均未發(fā)生突變。提取重組質(zhì)粒,如圖4所示,1,2為pcDNA3.1-BMP6重組質(zhì)粒,大小為5965bp;3,4為pcDNA....

圖4重組質(zhì)粒的提取

圖3菌液PCR擴(kuò)增2.4細(xì)胞培養(yǎng)

本文編號(hào)：3958807