CHOP(又稱DNA損傷誘導基因153(GADDl53)),作為生物體內(nèi)普遍存在的一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,是C/EBP家族成員之一,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導的細胞凋亡中扮演著重要的作用。在本文中我們首先用同源基因克隆的方法克隆與鑒定了草魚CHOP基因的全長cDNA序列(KX013389)及其啟動子序列。CiCHOP cDNA全長1520bp,包括1個246bp的5′非翻譯區(qū)、1個編碼248個氨基酸的747bp的開放閱讀框和1個527bp的3′非翻譯區(qū)。CHOP蛋白在各物種中高度保守,其核心結(jié)構(gòu)域均為“堿性亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域(BRLZ)”。系統(tǒng)進化樹分析顯示,草魚CHOP與其他魚類分布在同一分支上具有較高的相似性,特別是與斑馬魚的進化關(guān)系顯示最為接近。ATF4是細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的關(guān)鍵調(diào)控因子。RT-PCR結(jié)果顯示:不同濃度的衣霉素刺激均能誘導CiCHOP和CiATF4的表達上調(diào)。而隨著刺激時間的增加,他們的表達量也出現(xiàn)明顯上升并且表現(xiàn)出一致性,提示我們這兩者之間可能存在一定的相互作用關(guān)系。為了進一步研究CHOP在外界刺激后的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制,我們克隆了CiCHOP的啟動子序列并且原核表達和純化了CiATF6...

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【學位級別】：碩士

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圖3.3CHOP的系統(tǒng)進化樹

圖3.3CHOP的系統(tǒng)進化樹Fig3.3PhylogenetictreeofCHOPproteinsequencesClustalX軟件對比24個物種中的蛋白序列，其中包括：山羊(NP_001274160.1),野豬(NP_001138317.1),家鼠(N....

圖3.4不同濃度衣霉素刺激后草魚細胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達分析

31圖3.4不同濃度衣霉素刺激后草魚細胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達分析Fig3.4QuantitativeExpressionAnalysisofCiCHOP、CiATF4草魚CIK細胞經(jīng)不同濃度衣霉素刺激后CHOP、ATF4基因的表達情況。以0μg....

圖3.5相同濃度衣霉素刺激不同時間后草魚細胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達分析

32圖3.5相同濃度衣霉素刺激不同時間后草魚細胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達分析Fig3.5QuantitativeExpressionAnalysisofCiCHOP、CiATF4草魚CIK細胞經(jīng)相同濃度衣霉素刺激不同時間后CHOP、ATF4基因的表達情....

圖3.6草魚ATF4、ATF6與草魚CHOP啟動子的親和性分析

圖3.6草魚ATF4、ATF6與草魚CHOP啟動子的親和性分析Fig3.6AffinityanalysisofCiATF4andCiATF6WithCiCHOPpromoters（A）凝膠阻滯分析草魚ATF4與草魚CHOP啟動子（CiCHO....

本文編號：3931147