植物乳桿菌是乳酸菌中環(huán)境適應(yīng)性最強的菌株之一,是乳酸菌研究的模式菌株。它攜帶的天然質(zhì)粒對植物乳桿菌的生存具有重要意義。通過對植物乳桿菌天然質(zhì)粒的研究能夠促進植物乳桿菌的研究和運用。由于植物乳桿菌是革蘭陽性菌,其細胞壁相對較厚,破壁困難,質(zhì)粒提取率低,嚴(yán)重影響了植物乳桿菌質(zhì)粒的研究和應(yīng)用。就質(zhì)粒的大小,多樣性和數(shù)量而言,植物乳桿菌是質(zhì)粒最豐富的菌株之一。植物乳桿菌PC518菌株含有多個質(zhì)粒,難以分離純化。本研究優(yōu)化了質(zhì)粒提取方法,提高了質(zhì)粒提取率,并找到了檢出細菌中多質(zhì)粒體系的方法。對植物乳桿菌質(zhì)粒的分析可以豐富天然質(zhì)粒的數(shù)據(jù)庫,為天然質(zhì)粒的系統(tǒng)研究奠定基礎(chǔ)。目的1.改進質(zhì)粒提取方法,尋找一種提高革蘭陽性菌質(zhì)粒提取率的方法。2.檢出植物乳桿菌PC518菌株中的新質(zhì)粒。3.對新質(zhì)粒進行注釋和序列分析。材料和方法1.質(zhì)粒提取方法的改進:在溶菌酶處理的濃度、時間、溫度、溶菌酶的去除上進行改進,優(yōu)化革蘭陽性菌質(zhì)粒提取方法。對植物乳桿菌PC518、410、9L15、JS193菌株和食竇魏斯氏菌(Weissella cibaria)M2菌株分別用改良的質(zhì)粒提取方法和傳統(tǒng)的方法提取質(zhì)粒。2.用改良的質(zhì)...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1不同濃度的葡萄糖溶液洗滌處理后提取植物乳桿菌PC518質(zhì)粒的結(jié)果

17000×g離心1min，將收集管中的廢液。換無菌微量離心管后，將30μlElutionB后，17000×g離心1min。比較，質(zhì)粒DNA提取方法的可重復(fù)性和有效410、9L15、JS193菌株和食竇魏斯氏菌盒和改良的質(zhì)粒提取方法提取質(zhì)粒。泳與....

圖1-2不同的洗滌液處理后提取植物乳桿菌PC518質(zhì)粒的結(jié)果

泳道2：用5%葡萄糖溶液洗滌處理后提取的質(zhì)粒DNA；泳道3理后提取的質(zhì)粒DNA；泳道4：用15%葡萄糖溶液洗滌處理后提取midDNAconcentrations,theA260/A280ratiooftheplasmidDNAex.0;B:A....

圖1-3用7個方案提取植物乳桿菌PC518質(zhì)粒的瓊脂糖電泳結(jié)果

Aobtainedbynowashingtreatment;lane2:TheplasmidDNAobtainedbyshingtreatment;lane3:TheplasmidDNAobtainedby5%glucosesolu....

圖1-4用7個方案提取植物乳桿菌PC518質(zhì)粒的濃度Fig.1-4TheconcentrationoftheplasmidDNAofL.plantarumPC518extractedby7

第一部分革蘭陽性菌質(zhì)粒提取方法的改良糖凝膠電泳的結(jié)果顯示，在一定程度上，7個方案都能株中的質(zhì)粒，但提取效率差異較大。在質(zhì)粒的質(zhì)量和P3提取的質(zhì)粒都優(yōu)于方案P4、P5、P6和P7。在方案8-9條明亮的條帶，而在方案P4、P5和P6的泳道上有7的泳道上的條帶....

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