植物在生長發(fā)育過程中會遭遇各種逆境,WRKY轉錄因子家族在這其中幾乎都有參與,本研究以丹東蒲公英(Taraxacum antungense Kitag.)為試驗材料,研究了兩種非生物脅迫,兩種激素誘導后四種苯丙烷代謝途徑中關鍵酶基因相對表達量的變化,克隆了一名WRKY轉錄因子家族成員,對其進行研究,試驗結果如下:1.在丹東蒲公英中成功克隆得到了WRKY轉錄因子家族一名成員并命名為TaWRKY14(基因登錄號:MH513939),TaWRKY14轉錄因子,全長1056 bp,編碼351個氨基酸。TaWRKY14氨基酸序列的保守結構域與擬南芥AtWRKY14的相同。系統(tǒng)發(fā)育樹結果顯示TaWRKY14是WRKY IIe亞族基因,其親緣關系最接近的是丹參中的WRKY40。2.利用qRT-PCR對TaWRKY14表達模式進行分析,對丹東蒲公英根、葉柄、葉、花中的WRKY14進行組織特異性分析,結果表明WRKY14在丹東蒲公英根中含量最多,根>葉>葉柄>花,以葉中基因相對表達量視作1,根中的相對表達量高達4.8倍,其次是花和葉柄,在葉柄中表達量為0.65倍。根內(nèi)TaWRKY14基...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 蒲公英本草與現(xiàn)代研究
    1.2 轉錄因子及轉錄因子家族
        1.2.1 WRKY轉錄因子家族的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 WRKY轉錄因子家族結構
        1.2.3 WRKY轉錄因子家族功能
        1.2.4 WRKY轉錄因子在生物脅迫中的作用
        1.2.5 WRKY轉錄因子在非生物脅迫中的作用
    1.3 外源誘導對植物次生代謝的影響
        1.3.1 非生物脅迫
        1.3.2 生物脅迫
        1.3.3 外源激素處理
    1.4 苯丙烷代謝途徑中的相關蛋白酶
    1.5 本試驗目的和意義
    1.6 本文技術路線圖
2 丹東蒲公英TaWRKY14 轉錄因子克隆及分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗方法
    2.2 結果與分析
        2.2.1 TaWRKY14 目的基因擴增結果
        2.2.2 重組pMD19-T-TaWRKY14 菌液PCR鑒定結果
        2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育樹分析
        2.2.4 氨基酸序列比對分析
    2.3 小結
3 丹東蒲公英TaWRKY14 的表達分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗方法
    3.2 結果與分析
        3.2.1 TaWRKY14 基因的組織特異性分析
        3.2.2 鹽處理下TaWRKY14 基因相對表達量變化分析
        3.2.3 干旱處理下TaWRKY14 基因相對表達量變化分析
        3.2.4 水楊酸處理下TaWRKY14 基因相對表達量變化分析
        3.2.5 茉莉酸甲酯處理下TaWRKY14 基因相對表達量變化分析
    3.3 小結
4 TaWRKY14 調控苯丙烷代謝途徑的表達分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗方法
    4.2 結果與分析
        4.2.1 鹽處理后丹東蒲公英中綠原酸及咖啡酸的含量變化
        4.2.2 干旱處理后丹東丹東蒲公英中綠原酸及咖啡酸的含量變化
        4.2.3 激素處理后丹東蒲公英中綠原酸及咖啡酸的含量變化
        4.2.4 苯丙烷代謝途徑四種蛋白酶的基因相對表達量變化分析
    4.3 小結
5 體外驗證TaWRKY14
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 試驗方法
    5.2 結果與分析
        5.2.1 啟動子元件分析結果
        5.2.2 酵母單雜交結果
        5.2.3 TaWRKY14 目的基因的擴增
        5.2.4 pMD19-T-TaWRKY14 載體的鑒定
        5.2.5 pET28a-TaWRKY14 載體的鑒定
        5.2.6 IPTG誘導重組TaWRKY14 蛋白表達結果
        5.2.7 亞細胞定位結果分析
    5.3 小結
討論與結論
參考文獻
附錄
縮寫詞表
致謝
攻讀學位期間發(fā)表文章



本文編號：3780423