目的:提高大鼠原代結(jié)腸平滑肌細(xì)胞(CSMCs)培養(yǎng)方法的實用性及操作性。方法:結(jié)腸平滑肌剪碎,37℃0. 25%胰蛋白酶消化30 min,離心,25%胎牛血清(FBS)原代培養(yǎng),20%FBS傳代培養(yǎng),免疫組織化學(xué)法鑒定。結(jié)果:原代培養(yǎng)第3天結(jié)腸平滑肌細(xì)胞貼壁生長及組織塊周圍細(xì)胞游離并生長,第7天生長密集,第9天細(xì)胞生長"峰-谷"狀。傳代培養(yǎng)第2天細(xì)胞貼壁,第7天見CSMCs增殖明顯,第9天細(xì)胞平行生長,呈"峰-谷"狀。對第3代CSMCs復(fù)蘇后第2天少許細(xì)胞開始貼壁生長;第8天細(xì)胞增殖明顯;第14天可見細(xì)胞呈亞融合狀態(tài)。免疫組化鑒定CSMCs胞質(zhì)為棕黃色,見與細(xì)胞長軸平行的α-肌動蛋白纖維細(xì)絲,陽性表達(dá)的細(xì)胞達(dá)95%以上。結(jié)論:CSMCs簡化培養(yǎng),操作簡單易行,值得推廣。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要實驗試劑
        1.1.3 主要實驗儀器
    1.2 工作液配制
    1.3 方法
        1.3.1 結(jié)腸取材及平滑肌分離
        1.3.2 CSMCs原代培養(yǎng)
        1.3.3 CSMCs傳代培養(yǎng)
        1.3.4 未完全解離的結(jié)腸平滑肌繼續(xù)培養(yǎng)
        1.3.5 CSMCs免疫組化細(xì)胞鑒定
        1.3.6 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
2 結(jié)果
    2.1 CSMCs培養(yǎng)結(jié)果
        2.1.1 原代培養(yǎng)
        2.1.2 傳代培養(yǎng)
        2.1.3 復(fù)蘇培養(yǎng)
    2.2 CSMCs免疫組化鑒定傳代細(xì)胞（2代）結(jié)果
    2.3 CSMCs原代細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞污染
3 討論
    3.1 簡化培養(yǎng)步驟，提高方法的實用性及可操作性
    3.2 全程嚴(yán)格無菌操作
    3.3 結(jié)腸平滑肌精準(zhǔn)取材及有效清除腸內(nèi)容物是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵
    3.4 適合的細(xì)胞培養(yǎng)方法是結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)成功的保證
    3.5 創(chuàng)新性對其未解離的結(jié)腸平滑肌組織塊進(jìn)行原代培養(yǎng)



本文編號：3772883