基于Ⅰ型羊毛硫肽獨(dú)特的抑菌機(jī)制及其在抗耐藥菌治療領(lǐng)域極強(qiáng)的應(yīng)用潛能,通過(guò)對(duì)海洋鏈霉菌W007基因組的深度挖掘,發(fā)現(xiàn)了新穎的Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇,并解析了其組成。以pJTU2554為建庫(kù)載體構(gòu)建了鏈霉菌W007基因組文庫(kù),通過(guò)菌液PCR策略篩選獲得了包含完整基因簇的陽(yáng)性文庫(kù)克隆,將陽(yáng)性文庫(kù)克隆電擊轉(zhuǎn)化到大腸桿菌ET12567(pUZ8002)中,并與天藍(lán)色鏈霉菌M145和變鉛青鏈霉菌TK24進(jìn)行了接合轉(zhuǎn)移,構(gòu)建了Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇的異源表達(dá)體系。通過(guò)對(duì)基因簇上的簇內(nèi)基因進(jìn)行PCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)該新穎Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇成功導(dǎo)入了變鉛青鏈霉菌TK24和天藍(lán)色鏈霉菌M145中,結(jié)合抗菌活性和次級(jí)代謝譜的分析結(jié)果,證實(shí)該基因簇在變鉛青鏈霉菌TK24中獲得成功表達(dá)。雖然該Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇的異源表達(dá)體系已經(jīng)成功建立,但是該基因簇在異源表達(dá)宿主內(nèi)的表達(dá)水平及目標(biāo)產(chǎn)物的鑒定還有待進(jìn)一步確定。該研究為具有潛在應(yīng)用價(jià)值的新穎Ⅰ型羊毛硫肽的發(fā)現(xiàn)及其獨(dú)特的生物合成機(jī)制的解析奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 工具酶
        1.1.2 培養(yǎng)基
        1.1.3 菌株和質(zhì)粒
        1.1.4 引物
    1.2 方法
        1.2.1 I型羊毛硫肽生物合成基因簇的生物信息學(xué)分析
        1.2.2 Streptomyces sp.W007基因組文庫(kù)的構(gòu)建
        1.2.3 基于菌落PCR策略的基因組文庫(kù)的篩選
        1.2.4 I型羊毛硫肽基因簇異源表達(dá)體系的構(gòu)建
        1.2.5 I型羊毛硫肽基因簇異源表達(dá)株的抗菌活性及次級(jí)代謝譜的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 I型羊毛硫肽生物合成基因簇的預(yù)測(cè)
    2.2 海洋鏈霉菌W007基因組文庫(kù)的構(gòu)建
    2.3 基于PCR策略的海洋鏈霉菌W007基因組文庫(kù)的篩選
    2.4 I型羊毛硫肽基因簇異源表達(dá)體系的構(gòu)建
    2.5 I型羊毛硫肽異源表達(dá)株的抗菌活性及其次級(jí)代謝譜檢測(cè)結(jié)果
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