畢赤酵母是使用最廣泛、最具有發(fā)展前景的異源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。在畢赤酵母GS115中實(shí)現(xiàn)了來(lái)源于棉鈴蟲（Helicoverpa armigera）葡萄糖氧化酶基因hagox的異源表達(dá)。以棉鈴蟲hagox基因連接pPICZαA質(zhì)粒構(gòu)建重組表達(dá)載體,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115H菌株后得到含有hagox基因的重組酵母菌株。通過(guò)平板顯色、酶活力測(cè)定和SDS-PAGE分析,重組酵母中HaGOX成功表達(dá)。HaGOX含606個(gè)氨基酸,理論分子量66.9 kD,預(yù)測(cè)等電點(diǎn)pH 4.78。經(jīng)測(cè)試重組HaGOX的最適pH為6.0～7.0,最適溫度為40℃,對(duì)6-脫氧-葡萄糖和D-葡萄糖具有高催化活力,以D-葡萄糖為底物的比活力為13.63 U·mg^-1,對(duì)其他吡喃糖和二糖沒(méi)有催化活力。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 棉鈴蟲、菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑與儀器
        1.1.3 培養(yǎng)基
            ①YPDZ培養(yǎng)基:
            ②10×酵母無(wú)氨基氮源(YNB):
            ③500×生物素:
            ④PTM1微量鹽:
            ⑤酵母發(fā)酵鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基:
            ⑥酵母發(fā)酵鹽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 棉鈴蟲葡萄糖氧化酶基因hagox克隆
        1.2.2 重組表達(dá)載體pPICZαA/HaGOX的構(gòu)建及基因序列分析
        1.2.3 重組表達(dá)載體pPICZαA/HaGOX轉(zhuǎn)化酵母及誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.4 重組HaGOX蛋白的純化
        1.2.5 酶蛋白濃度測(cè)定
        1.2.6 葡萄糖氧化酶活力的測(cè)定
        1.2.7 重組HaGOX酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組HaGOX酵母表達(dá)載體的構(gòu)建及hagox基因分析
    2.2 重組葡萄糖氧化酶HaGOX的表達(dá)分析
    2.3 HaGOX酶學(xué)性質(zhì)分析
        2.3.1 溫度和pH對(duì)酶活的影響
        2.3.2 金屬離子及化學(xué)試劑對(duì)HaGOX酶活力的影響
        2.3.3 HaGOX的底物特異性分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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