玉米是重要的糧食、飼料、工業(yè)原料的作物,具有非常重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)意義。玉米持續(xù)升高的需求推動(dòng)了百余年來玉米育種研究的不斷深入。CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為一種最新的基因組編輯技術(shù),具有簡單,高效的優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于多種物種的基因組編輯研究且取得了眾多成果。開展利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)敲除玉米基因的研究可望創(chuàng)造出優(yōu)異育種材料,也是玉米基因功能分析的重要手段。本論文利用CRISP/Cas9系統(tǒng)對(duì)玉米Trihelix轉(zhuǎn)錄因子ZmThx20基因和具有bHLH結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子ZwPTF1基因進(jìn)行定點(diǎn)編輯研究,驗(yàn)證CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)玉米的編輯效率和特異性。我們利用基因槍轟擊法獲得轉(zhuǎn)基因玉米,檢測了轉(zhuǎn)基因植株中CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)這兩個(gè)基因的編輯效率及其遺傳穩(wěn)定性,初步研究結(jié)果如下:1.通過基因槍轟擊法將構(gòu)建好的CRISP/Cas9系統(tǒng)的植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)入玉米幼胚中,通過植物組織培養(yǎng)方法獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。移栽成活后定植田間,自交或姊妹交收獲種子。2.利用除草劑對(duì)T1代轉(zhuǎn)基因玉米進(jìn)行除草劑草丁膦涂抹篩選,然后對(duì)抗性較好的植株進(jìn)行PCR檢測。在轉(zhuǎn)入載體VK005-02-G... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第一部分 前言
    1.1 基因編輯技術(shù)的發(fā)展及意義
    1.2 CRISPR/Cas編輯系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)以及原理
    1.3 CRISPR/Cas9在植物研究中應(yīng)用及進(jìn)展
    1.4 CRISPR/Cas9系統(tǒng)在玉米中的應(yīng)用
    1.5 基因槍在植物遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用
    1.6 ZmThx20基因和ZmPTF1基因研究進(jìn)展
    1.7 研究目的與意義
第二部分 材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 試劑和耗材
    2.3 培養(yǎng)基
    2.4 sgRNA設(shè)計(jì)
    2.5 CRISPR/Cas9載體的構(gòu)建
    2.6 基因槍轟擊法轉(zhuǎn)化玉米幼胚愈傷組織
    2.7 轉(zhuǎn)基因玉米的篩選
    2.8 CTAB法小量提取玉米基因組DNA
    2.9 PCR引物設(shè)計(jì)和檢測體系以及程序
    2.10 側(cè)流式轉(zhuǎn)基因檢測試紙條檢測篩選標(biāo)記基因bar
    2.11 CRISPR/Cas9編輯效率的檢測
    2.12 基因編輯植株籽粒形態(tài)學(xué)觀測
    2.13 基因編輯植株的分子檢測
第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
    3.1 sgRNA的設(shè)計(jì)以及植物表達(dá)載體構(gòu)建
    3.2 基因槍介導(dǎo)的玉米愈傷組織轉(zhuǎn)化
    3.3 轉(zhuǎn)基因植株的檢測
    3.4 轉(zhuǎn)基因玉米植株的基因編輯檢測
    3.5 基因編輯植株形態(tài)學(xué)觀測
    3.6 基因編輯植株靶基因表達(dá)的分子檢測
第四部分 總結(jié)與展望
    4.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)玉米基因組編輯
    4.2 CRISPR/Cas9系統(tǒng)編輯玉米基因的效率
    4.3 CRISPR/Cas9系統(tǒng)在玉米中的應(yīng)用前景
    4.4 影響玉米轉(zhuǎn)基因效率的因素的推測
    4.5 論文后續(xù)的展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：3677577