發(fā)布時間：2022-08-12 19:29

　　硫元素是參與生命活動的重要非金屬元素之一。硫酸鹽進入細胞后,由ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）催化生成腺苷-5’-磷腺硫酸（Adenosine-5’-phosphorus sulfate,APS）,APS在APS還原酶的催化下生成亞硫酸,或者在APS激酶催化下生成3’-磷酸-腺苷5’-磷酰硫酸（3’-phosphoadenosine 5’-phosphosulfate,PAPS）。PAPS是合成硫代葡萄糖苷的原料之一,也是大規(guī)模合成肝素類多糖的一個關(guān)鍵原料,是胞內(nèi)硫酸化反應(yīng)的唯一硫酸根供體。硫酸轉(zhuǎn)移酶以PAPS為底物硫酸化生成磺酸物,其副產(chǎn)物為3’,5’-二磷酸腺苷（3’,5’-biphosphate adenosine,PAP）,生成的PAP在3’腺苷酸酶的催化下生成單磷酸腺苷AMP和無機磷酸。PAPS在生物材料中含量甚微,商品化PAPS價格貴且純度低。本研究以PAP/PAPS結(jié)合蛋白為工具,建立了從生物材料中純化和富集PAPS的方法,并進行了定量分析。酵母3’,5’二磷酸核苷酸酶（3’,5’bisphosphate nucleotidase,BPNT或者HAL2）可... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1 硫酸鹽的同化代謝
        1.1 硫的生物學功能
        1.2 硫同化途徑
    2 PAPS的合成、運輸及鑒定分析
        2.1 PAPS胞內(nèi)合成及運輸
        2.2 PAPS的生物學作用
        2.3 PAPS的鑒定分析
    3 PUF蛋白相關(guān)研究
    4 研究目的及意義
第2章 麥芽糖結(jié)合蛋白-酵母3',5'二磷酸核苷酸酶融合蛋白表達體系的構(gòu)建及應(yīng)用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試驗材料試劑
        2.2 表達載體的構(gòu)建
        2.3 MBP-HAL2 融合蛋白的表達及純化
        2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測
        2.5 Braford法定量蛋白質(zhì)濃度
        2.6 融合蛋白結(jié)合PAP的分析
    3 結(jié)果與結(jié)論
        3.1 p MAL-HAL2 載體構(gòu)建
        3.2 p ET24-MBPHAL2 表達載體構(gòu)建
        3.3 MBP-HAL2 融合蛋白的表達及純化
        3.4 融合蛋白MBP-HAL2 定量
        3.5 MBP-HAL2 融合蛋白結(jié)合PAP
    4 小結(jié)
第3章 PAP/PAPS體外富集及定量分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料與試劑
        2.2 細菌核苷酸的提取
        2.3 利用MBP-HAL2 融合蛋白富集PAP/PAPS
        2.4 PAP/PAPS定量分析
    3 結(jié)果
        3.1 硫酸鹽處理影響大腸桿菌核苷酸量
        3.2 富集樣品中PAP/PAPS的定量分析
    4 小結(jié)
第4章 PAP/PAPS胞內(nèi)濃度調(diào)節(jié)的初探
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料與試劑
        2.2 構(gòu)建His9-PUF表達體系
        2.3 細菌生長曲線測定
        2.4 構(gòu)建p ETDuet-PUF和 p ET24a-Cys Q共表達體系
        2.5 PUF蛋白RNA結(jié)合域與目標RNA片段的互作分析
    3 結(jié)果
        3.1 PUF12的誘導(dǎo)表達沒有影響大腸桿菌的生長
        3.2 PUF12 的誘導(dǎo)表達沒有影響大腸桿菌Cys Q蛋白質(zhì)的表達
        3.3 PUF12 的誘導(dǎo)表達沒有影響大腸桿菌Cys Q的轉(zhuǎn)錄
        3.4 PUF12與目標寡核苷酸的互作具有核酸長度依賴性
    4 結(jié)論
結(jié)論與展望
參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3676461