發(fā)布時(shí)間：2022-07-04 21:39

　　采用易錯(cuò)PCR方法,對(duì)β-甘露聚糖酶進(jìn)行體外分子定向進(jìn)化,通過(guò)調(diào)整dNTP比例和加入不同濃度的Mn2+,向β-甘露聚糖酶中隨機(jī)引入突變,構(gòu)建突變文庫(kù),并對(duì)篩選得到的突變菌株的突變酶酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究.結(jié)果表明:在突變文庫(kù)的構(gòu)建過(guò)程中,當(dāng)Mn2+濃度為0.01 mmol/L時(shí),陽(yáng)性轉(zhuǎn)化率最高,達(dá)到80%,氨基酸的突變個(gè)數(shù)為2.0個(gè),符合易錯(cuò)PCR突變文庫(kù)的構(gòu)建原則;經(jīng)過(guò)兩輪易錯(cuò)PCR構(gòu)建的突變文庫(kù)庫(kù)容量約為4000,從中篩選出的突變畢赤酵母菌X-33/p GAPZαA-GwMan26A-27的突變酶GwMan26A-27具有耐酸、耐高溫且酶活力較高的特性;與突變前相比,GwMan26A-27具有較寬的酶促反應(yīng)溫度范圍和適宜pH值范圍,熱穩(wěn)定性和p H穩(wěn)定性均有較大提升;在胃蛋白酶液和胰蛋白酶液中水浴2 h,GwMan26A-27的消化酶穩(wěn)定性較突變前也均有所提升. 

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 培養(yǎng)基
    1.4 儀器與設(shè)備
    1.5 實(shí)驗(yàn)方法
        1.5.1 易錯(cuò)PCR引物的設(shè)計(jì)方法
        1.5.2 易錯(cuò)PCR擴(kuò)增方法
        1.5.3 易錯(cuò)PCR突變文庫(kù)的構(gòu)建方法
        1.5.4 重組子的鑒定方法
        1.5.5 易錯(cuò)PCR突變文庫(kù)的篩選方法
            1.5.5. 1 突變酶的初篩
            1.5.5. 2 突變酶的復(fù)篩
        1.5.6 突變酶酶學(xué)性質(zhì)的研究方法
            1.5.6. 1 溫度和pH值對(duì)突變酶酶活力的影響
            1.5.6. 2 突變酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性
            1.5.6. 3 消化酶對(duì)突變酶酶活力的影響
2 結(jié)果與分析
    2.1 易錯(cuò)PCR突變文庫(kù)的構(gòu)建結(jié)果分析
        2.1.1 易錯(cuò)PCR條件的確立
        2.1.2 易錯(cuò)PCR突變文庫(kù)的建立
    2.2 易錯(cuò)PCR突變文庫(kù)的篩選結(jié)果分析
    2.3 突變酶酶學(xué)性質(zhì)的研究結(jié)果分析
        2.3.1 溫度和pH值對(duì)突變酶酶活力的影響結(jié)果分析
        2.3.2 突變酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性結(jié)果分析
        2.3.3 消化酶對(duì)突變酶活力的影響結(jié)果分析
3 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]耐高溫β-甘露聚糖酶畢赤酵母菌M27-8發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 熊進(jìn),黃魁英,夏楓耿,陳舒潔,胡海艷.  中國(guó)飼料. 2017(19)



本文編號(hào)：3655973