Endothiapepsin蛋白是一種天冬氨酸蛋白水解酶,最初是從植物病菌絲狀子囊菌栗疫菌（Endothia parasitic）分離鑒定的。然而在球孢白僵菌（Beauveria bassiana）基因組中也存在著編碼endothiapepsin-like蛋白的基因（BbeapA）,本實(shí)驗(yàn)室在前期關(guān)于不同致病性球孢白僵菌菌株在早期階段侵染家蠶表皮比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究中發(fā)現(xiàn)endothiapepsin-like蛋白和其他一些天冬氨酸蛋白酶在高毒力菌株GXsk1011中是上調(diào)表達(dá)的,但是該蛋白在致病過程中的作用以及其他一些功能在球孢白僵菌中尚未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在前期將編碼endothiapepsin-like蛋白的基因進(jìn)行了克隆和測(cè)序的基礎(chǔ)上,將其氨基酸序列與來源于栗疫菌的endothiapepsin（CAA37944）、球孢白僵菌Bb2860菌株的endothiapepsin-like（XP008601085）、家蠶的病原aspergillopepsin A-like天冬氨酸蛋白酶（XP022385274）和煙曲霉的aspergillopepsin F（XP753324）的氨基酸序列進(jìn)行多重... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市211工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BbeapA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物A：M：2000DNAmarker；1：pPIC9K-BbeapA-F/R引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

圖 3.2 轉(zhuǎn)化子的菌液 PCR 檢測(cè)圖 A：M：2000 DNAmarker；1-8：轉(zhuǎn)化子的菌液 PCR（pPIC9K-BbeapA-F/R）；圖 B：M：2000 DNAmarker；1-8：轉(zhuǎn)化子的菌液 PCR（pPICZαA-BbeapA-F/R）；Fig.3.2 Bacterial liquid PCR detection of transformants圖 A: M: 2000 DNAmarker; 1-8: Bacterial liquid PCR products of transformants (pPIC9K-BbeapA-F/R)圖 B: M: 2000 DNAmarker; 1-8: Bacterial liquid PCR products of transformants (pPICZαA-BbeapA-F/R)3.3.3 生物信息學(xué)分析3.3.3.1 堿基突變位點(diǎn)分析及氨基酸序列多重比對(duì)將球孢白僵菌 GXsk1011 菌株的 endothiapepsin-like 蛋白與其同源的天冬氨酸蛋白酶的氨基酸序列進(jìn)行多重序列比對(duì)，比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在 GXsk1011 菌株的endothiapepsin-like 蛋白的 C 端保守結(jié)構(gòu)位點(diǎn)的一個(gè)氨基酸發(fā)生了突變，由 Ser/Th變?yōu)?Gly，如圖 3.3 紅色圓圈所示。

圖 3.4 Endothiapepsin-like 蛋白的 N-糖基化位點(diǎn)預(yù)測(cè)Fig.3.4 Prediction of the N-glycosylation site of endothiapepsin-like3.3.3.4 Endothiapepsin-like 蛋白的三維結(jié)構(gòu)以 栗 疫 菌 的 endothiapepsin （ PDB ID: 5hct ） 蛋 白 作 為 模 板 ， 利 用SWISS-MODEL 在線預(yù)測(cè) endothiapepsin-like 蛋白的三維結(jié)構(gòu)，側(cè)視圖和直視圖如圖 3.5 所示，endothiapepsin-like 蛋白催化位點(diǎn) Asp89和 Asp276用紅色進(jìn)行了標(biāo)記。


本文編號(hào)：3638220