目的:本研究用腺病毒或慢病毒感染人脂肪干細胞,通過細胞培養(yǎng)、Real-timePCR、免疫熒光和Western blotting等實驗方法證明miR-150通過靶向調(diào)控Notch3/FAK/ERK1/2負向調(diào)控人脂肪干細胞（hADSCs）的成骨分化。為骨損傷骨缺損等治療提供新的思路。研究方法:1.體外條件下,培養(yǎng)人脂肪干細胞,將三組細胞:N組,GFP組,miR-150組于六孔板中培養(yǎng)。用過表達miR-150的腺病毒感染hADSCs。Realtime-PCR檢測miR-150的表達;Western blotting檢測Notch3的表達水平。Western blotting檢測FAK、pFAK、ERK1/2、pERK1/2、ROHA等成骨信號通路相關(guān)蛋白。用免疫熒光檢測FAK、pFAK、ERK1/2、pERK1/2、RhoA、F-actin的蛋白表達。CCK8檢測miR-150對hADSCs增殖的影響。2.將四組細胞:GFP組,Notch3-siR1組,Notch3-siR2,Notch3-siR3組于六孔板中培養(yǎng)。用敲除Notch3的慢病毒感染hADSCs。Western blotti... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

過表達miR-150的hADSCs的構(gòu)建標尺示100μm2A2B2C

中國醫(yī)科大學碩士學位論文16活性低于N組和GFP組。ALP染色結(jié)果所示，同N組和GFP組比較，miR-150組ALP染色強度減弱。（圖5、6、7）5ANN+OMGFP+OMmiR-150+OM0.00.51.01.52.02.5RelativelevelsofRUNX-2(normalizedtoGAPDH)*#5B圖5hADSCs成骨誘導(dǎo)7天RUNX-2表達A.RUNX-2在hADSCs中的表達情況；B.統(tǒng)計學分析，與N組相比，*P<0.05;統(tǒng)計學分析，與GFP+OM組相比，#P<0.05NN+OMGFP+OMmiR-150+OM0123**#ALPactivity圖6hADSCs成骨誘導(dǎo)7天ALP表達統(tǒng)計學分析，與N組相比，**P<0.01;統(tǒng)計學分析，與GFP+OM組相比，#P<0.05圖7hADSCs成骨誘導(dǎo)7天ALP染色，標尺示50μmNGFPmiR-1507A7B7C7DOM36KD56KDGAPDHRUNX-2－＋＋＋50μm

中國醫(yī)科大學碩士學位論文20統(tǒng)計學結(jié)果分析，與N組相比，***P<0.001;統(tǒng)計學結(jié)果分析，對比著control+OM組，##P<0.01圖12hADSCs成骨誘導(dǎo)7天ALP染色，標尺示50μmA.N組ALP染色結(jié)果；B.N+OM組ALP染色結(jié)果；C.control+OM組ALP染色結(jié)果;D.miR-150inhibitor+OM組ALP染色結(jié)果3.3.2抑制miR-150表達后檢測相關(guān)蛋白在hADSCs的表達檢測Notch3、pFAK、FAK、pERK1/2、ERK、RhoA在hADSCs中的表達，結(jié)果顯示，miR-150inhibitor組hADSCs的Notch3、pFAK、pERK1/2、RhoA蛋白的表達量明顯高于N組和control組。FAK、ERK與對照組相比無差別。（圖13）13A12A12B12C12D50μmNcontrolmiR-150inhibitorNotch3pFAKFAKERK1/2pERK1/2RhoAGAPDH280KD125KD125KD44KD44KD21KD36KD

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3626376