目的探究miR-449是否具有調控骨髓間充質干細胞（MSCs）成骨分化的作用。方法分離、培養(yǎng)骨髓MSCs,采用流式細胞儀檢測CD44、CD29、CD34、CD45等表面相關標志抗原的表達鑒定骨髓MSCs;將MSCs分為對照組、miR-449a組、miR-449b組及anti-miR-449組,對照組用成骨誘導培養(yǎng)基培養(yǎng),其余各組分別經miR-449a/b或inhibitors轉染后在成骨誘導培養(yǎng)基培養(yǎng),分別于培養(yǎng)第3、6、9、12天檢測各組堿性磷酸酶活性,qRT-PCR檢測miR-449a/b對成骨特異性基因Runx2、Osterix表達的影響。結果①第4代間充質干細胞CD44、CD29表達陽性,而CD34和CD45表達陰性,符合骨髓間充質干細胞的特征。②成骨誘導培養(yǎng)3、6、9、12 d后,MSCs細胞堿性磷酸酶活性較上一時間點升高,且呈時間依賴性,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;MSCs成骨誘導培養(yǎng)3、6、9、12 d后,Runx2、Osterix表達水平逐漸升高。③miR-449a組和miR-449b組AKP活性低于對照組,而anti-miR-449組AKP活性升高,差異有... 

【文章來源】：醫(yī)學信息. 2020,33(04)

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骨髓MSCs成骨誘導后成骨基因Runx2和Osterix表達

AKP活性檢測結果顯示，與對照組相比，miR-449a組和miR-449b組AKP活性低于轉染對照細胞，而anti-miR-449組AKP活性升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05);qRT-PCR檢測轉染miR-449a/b和miR-449 inhibitors對成骨特異性基因Runx2、Osterix表達的影響顯示，與對照組相比，miR-449a組和miR-449b組Runx2、Osterix表達均下調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見圖4。3 討論

流式細胞術檢測骨髓MSCs細胞免疫標記

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR?125b調控Runx2/Osx表達對骨髓間充質干細胞成骨機制的影響[J]. 彭俊,劉英杰,宗陽,詹玉林.  東南國防醫(yī)藥. 2019(02)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang.  Bone Research. 2015(01)



本文編號：3607414