骨骼肌生成是一個(gè)高度有序的過(guò)程,包括成肌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞融合形成肌管以及這些肌管進(jìn)一步分化為肌纖維。這一過(guò)程需要依賴轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之間的連續(xù)級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)室之前的一項(xiàng)研究表明,TCEA3能促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化,但是其作用的分子機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為模型,研究TCEA3的作用及分子機(jī)制。TCEA3是轉(zhuǎn)錄延伸因子家族的成員。其不僅可以促進(jìn)轉(zhuǎn)錄,在細(xì)胞質(zhì)中還行使其他作用。我們通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ANXA1與TCEA3相互作用,我們推測(cè)TCEA3和ANXA1在小鼠成肌細(xì)胞分化的過(guò)程中扮演重要角色。在本研究中,我們檢測(cè)了TCEA3和ANXA1在C2C12成肌細(xì)胞中的表達(dá),定位和作用;檢測(cè)了TCEA3在過(guò)表達(dá)和抑制后蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化和肌纖維數(shù)量的改變;并發(fā)現(xiàn)TCEA3與ANXA1相互作用通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β途徑影響細(xì)胞分化;以此說(shuō)明TCEA3在小鼠成肌細(xì)胞分化中的作用。主要獲得的研究結(jié)果如下:（1）隨著C2C12成肌細(xì)胞肌管的增加TCEA3的表達(dá)逐漸增加。在增殖期（0 D）和不同分化期（分化1-9 D）間,隨著C2C12成肌細(xì)胞肌管逐漸增加,TCEA3的熒光強(qiáng)度逐漸增加。... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pEGFP-N2載體質(zhì)粒圖譜

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文合成。表 2-2 TCEA3 基因的激活靶序列ab. 2-2 Four sgRNAs targeting different sites of TCEA3 promoter regio. 序列3-1 CACCGCTTGGGCATAGCTCCCTCT3-2 CACCGCCACCCCTCCCCCCAGCGA3-3 CACCGTGTCCCGGAAGAAGACGGA3-43-5CACCGAAGAAGACGGAAGGGGCCCCACCGGCCCCTGCTACCTCACCG pSPgRNA 載體：pSPgRNA 載體見圖 2-2，酶切體系如表 2-3。

綠色熒光表示 TCEA3 蛋白的分布，藍(lán)色表示核的存在。標(biāo)尺：100μm。圖 3-2 免疫熒光檢測(cè) TCEA3 在 C2C12 細(xì)胞中的定位。.3-2 Immunofluorescence detection localization of TCEA3 at C2C12 cell differentiation 核質(zhì)蛋白提取檢測(cè) TCEA3 在 C2C12 成肌分化不同時(shí)期的定位別收集分化 0 天（0 D）、3 天（3 D）、5 天（5 D）的 C2C12 成肌細(xì)胞，根據(jù)核質(zhì)蛋劑盒上的步驟進(jìn)行核質(zhì)蛋白分離。采用 Western Blot 檢測(cè)這三個(gè)時(shí)期 TCEA3 蛋白表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TCEA3 主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，隨著分化的進(jìn)展，TCEA3 的表達(dá)趨勢(shì)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The effects of microRNA-34a regulating Notch-1/NF-κB signaling pathway on lipopolysaccharide-induced human umbilical vein endothelial cells[J]. Yun Ge,Man Huang,Yue-feng Ma.  World Journal of Emergency Medicine. 2017(04)
[2]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li.  Bone Research. 2016(01)



本文編號(hào)：3593597