隨著分子生物學技術的不斷發(fā)展和需求的多樣化,用于核酸檢測的各種PCR衍生技術應運而生。數(shù)字PCR是一種單分子水平的大規(guī)模分區(qū)擴增定量核酸檢測技術。該技術以微腔室/微孔或微滴作為PCR反應器,無需校準物和繪制標準曲線即可實現(xiàn)對樣品初始濃度的絕對定量,具有高靈敏度、高特異性和高精確度的特點。本文詳細介紹了數(shù)字PCR的技術發(fā)展史、作用原理以及儀器平臺類型,系統(tǒng)闡述了數(shù)字PCR在轉基因檢測、疾病診斷、環(huán)境及食品監(jiān)管等方面的應用概況,并對該技術的應用前景進行了展望,以期對未來數(shù)字PCR的開發(fā)利用提供參考。 

【文章來源】：遺傳. 2020,42(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

數(shù)字PCR的作用原理

生物技術的迅猛發(fā)展促進了轉基因作物的誕生。在轉基因植物研究中，為確保轉基因植物的穩(wěn)定整合和遺傳，通常會選擇單拷貝的純合轉基因植株作為進一步研究的對象，而且純合子個體的檢測和隨后的選擇是促進轉基因植物從實驗室轉移到大田的關鍵。此外，在轉基因作物進入市場前，各個國家、組織和地區(qū)都制定了明確的政策和法規(guī)進行監(jiān)管，轉基因作物中插入的外源基因拷貝數(shù)是生物安全評價中一項重要內容[23]。因此，在進行轉基因植株檢測時會根據(jù)需求不同測定其拷貝數(shù)與合子性。先前的研究一般采用Southern blot[24,25]、qPCR[26～28]和NGS[29]等方法進行檢測。但以上檢測方法均存在一定程度的缺陷。Southern blot可確定被檢轉基因植株的拷貝數(shù)，也可根據(jù)雜交信號亮度差異區(qū)分雜合與純合植株，但模板需求量大而且對DNA質量要求較高，耗時繁瑣而且若采用同位素標記探針還會有輻射影響[30]。采用qPCR對于轉基因植株的合子性進行檢測，不同的實驗室獲得結果存在爭議：或主張該方法無法區(qū)分純合子與雜合子；或可通過精確的擴增條件進行有效區(qū)分雜合子[26]。若以qPCR檢測轉基因植株的拷貝數(shù)，對于基因組較大的轉基因植株則無法區(qū)分一個或兩個拷貝，需達到2倍以上的差異[31]。dPCR在轉基因植株拷貝數(shù)及其雜合子鑒定方面具有模板用量少、節(jié)省時間及勞動量和結果更為精準的優(yōu)勢。在玉米(Zea mays L.)中，采用qPCR和ddPCR兩種方法均可成功檢測出轉基因玉米雜合子，但ddPCR因其可直接絕對定量而更為便捷[32]。目前已建立了適用于水稻(Oryza.sativa L.)、柑橘(Citrus sinensis L.)、馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)、玉米(Zea mays L.)、番茄(Solanum lycopersicum L.)和小麥(Triticum aestivum L.)6種轉基因作物外源基因拷貝數(shù)的ddPCR檢測體系[33]。3.1.2 dPCR對轉基因產品成分的檢測

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3565960