低聚葡萄糖氧化酶能夠氧化低聚葡萄糖末端殘基生成相應(yīng)的低聚糖酸,在低聚糖酸的制備、食品、化工等方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。從黑曲霉基因組中發(fā)現(xiàn)1個(gè)疑似編碼低聚葡萄糖氧化酶開(kāi)放讀框,共編碼473個(gè)氨基酸序列,包含2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域（FAD結(jié)合域和黃素結(jié)構(gòu)域）和4個(gè)活性位點(diǎn)（His80、Cys141、Asp377和Try428）;在畢赤酵母中表達(dá)的重組酶蛋白大小為61 kDa,比酶活0.33 U/mg。重組酶的最適作用溫度和pH值分別為75℃和9.0;在55～85℃和pH 5.0～9.0范圍內(nèi)孵育4 h,仍能保持70%以上的酶活;Mn²⁺和Fe³⁺分別對(duì)酶活具有最強(qiáng)的激活和抑制作用。該酶的K_m和V_max為0.48 mmol/L和2.22μmol/（L·min）,對(duì)麥芽三糖、麥芽四糖和麥芽五糖具有相對(duì)較高酶活。 

【文章來(lái)源】：食品與發(fā)酵工業(yè). 2020,46(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

pH對(duì)AnGoox的酶活和pH穩(wěn)定性的影響

以不同濃度(1、5、10、15、20 mmol/L)的乳糖為底物,在最適溫度和pH條件下測(cè)定酶活,采用雙倒數(shù)法,繪制AnGoox的動(dòng)力學(xué)曲線,如圖5所示,求得AnGoox的Km值為0.48 mmol/L,Vmax為2.22 μmol/(L·min)。該酶的Km高于Paraconiothyrium sp. 的Goox(0.11 mmol/L)[13]和S. strictum的Goox(0.066 mmol/L)[18],說(shuō)明AnGoox對(duì)乳糖底物的親和力低于前期報(bào)道的2種酶。2.4.5 底物特異性研究

根據(jù)現(xiàn)有報(bào)道的Goox序列Goox-vn和Goox-T1,利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)黑曲霉基因組序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),黑曲霉基因組中存在一個(gè)疑似goox的開(kāi)放讀框,進(jìn)一步對(duì)來(lái)源于黑曲霉的Goox(命名為AnGoox)和Goox-vn、Goox-T1進(jìn)行序列比對(duì),結(jié)果如圖1所示。AnGoox與Goox-vn和Goox-T1的相似度分別為28.98%和28.71%。在它們的氨基酸序列中,都包含2個(gè)較為保守的結(jié)構(gòu)域,一段位置在37～174之間,長(zhǎng)度為137的FAD結(jié)合域,其起始基序?yàn)?PAAI)。另一段在結(jié)尾處長(zhǎng)度約為44的黃素結(jié)構(gòu)域。通過(guò)氨基酸序列比對(duì),可知與FAD進(jìn)行雙共價(jià)連接的關(guān)鍵氨基酸殘基為His80和Cys141。參與反應(yīng)的關(guān)鍵氨基酸殘基為Asp377和Try428,2個(gè)氨基酸引發(fā)底物的氫離子的轉(zhuǎn)移,從而降低FAD輔因子能量。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乳糖酸的研究進(jìn)展[J]. 白會(huì)釵,繆銘,江波,沐萬(wàn)孟,張濤.  食品工業(yè)科技. 2012(02)



本文編號(hào)：3543148