經濟的快速發(fā)展造成了日益嚴重的環(huán)境污染問題,重金屬排放量逐年增加,重金屬污染已經成為我國水環(huán)境污染的突出問題之一。銅作為水生生物必需的營養(yǎng)元素之一,既是大自然廣泛存在的一種過渡金屬元素,也是生物體參與重要生命活動的酶類的組成成分。隨著硫酸銅作為水產養(yǎng)殖藥物和飼料添加劑被大量使用,水體中銅的污染日益嚴重,研究表明溶解態(tài)的銅毒性最強,毒性范圍廣闊,本文就溶解態(tài)的銅對水生動物的胚胎發(fā)育毒性作用及其機制進行了初步研究。選取技術標準成熟的斑馬魚作為模式生物,采用急性暴露實驗（96 h）研究Cu²⁺對斑馬魚胚胎的發(fā)育毒性作用。結果顯示:銅對斑馬魚胚胎有明顯的致死、致畸和抑制孵化效應,表現(xiàn)為發(fā)育遲緩,色素沉積緩慢,孵化延遲或者不孵化,其96 h的LC₅₀為4.122 mg/L。進一步研究顯示:Cu²⁺低濃度下的即可抑制斑馬魚的胚胎發(fā)育,當濃度高于0.20 mg/L可導致其孵化率為零。采用流式細胞術、Long-PCR、RT-PCR等方法對Cu²⁺所致斑馬魚胚胎的細胞凋亡、線粒體生物發(fā)生、基因表達量以及抗氧化酶活性進... 

【文章來源】：煙臺大學山東省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 文獻綜述
    1.1 重金屬的污染現(xiàn)狀
        1.1.1 重金屬銅污染及其毒害作用
        1.1.2 銅的體內代謝調節(jié)
        1.1.3 銅與氧化應激效應關系
        1.1.4 銅與線粒體
    1.2 重金屬銅對魚類的毒性效應
        1.2.1 重金屬銅對魚類的早期發(fā)育的影響
        1.2.2 重金屬銅對魚類生理生化作用的影響
    1.3 模式生物斑馬魚的毒理學研究
        1.3.1 斑馬魚的簡介
        1.3.2 斑馬魚的研究概況
        1.3.3 斑馬魚的優(yōu)勢
    1.4 本研究的目的、內容和意義
        1.4.1 研究目的與內容
        1.4.2 研究意義
2 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎發(fā)育的急性毒性實驗
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 儀器
        2.1.3 溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 成年斑馬魚的飼養(yǎng)
        2.2.2 斑馬魚胚胎的收集
        2.2.3 斑馬魚胚胎的選擇
        2.2.4胚胎染毒實驗
    2.3 統(tǒng)計學分析
    2.4 結果
        2.4.1 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎發(fā)育進程及形態(tài)的影響
        2.4.2 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎死亡率的影響
    2.5 討論
3 斑馬魚胚胎細胞ROS、線粒體質量數(shù)及膜電勢的測定
    3.1 斑馬魚胚胎細胞總ROS的測定
        3.1.1 材料
        3.1.2 儀器
        3.1.3 溶液的配制
        3.1.4 實驗方法
    3.2 斑馬魚胚胎線粒體源ROS的測定
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 實驗方法
    3.3 斑馬魚胚胎細胞線粒體質量數(shù)的測定
        3.3.1 溶液的配制
        3.3.2 實驗方法
    3.4 斑馬魚胚胎細胞線粒體膜電勢的測定
        3.4.1 溶液的配制
        3.4.2 實驗方法
    3.5 統(tǒng)計學分析
    3.6 結果
        3.6.1 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎細胞總ROS、線粒體源ROS的影響
        3.6.2 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎線粒體數(shù)的影響
        3.6.3 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎細胞線粒體膜電勢的影響
    3.7 討論
4 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎凋亡、mtDNA損傷、mRNA表達量的影響
    4.1 Annexin V-FITC法、AO法檢測斑馬魚胚胎細胞凋亡情況
        4.1.1 材料
        4.1.2 儀器
        4.1.3 溶液的配制
        4.1.4 實驗方法
    4.2 斑馬魚胚胎mt DNA損傷測定
        4.2.1 材料
        4.2.2 儀器
        4.2.3 溶液的配制
        4.2.4 實驗方法
    4.3 斑馬魚胚胎m RNA表達量的測定
        4.3.1 材料
        4.3.2 儀器
        4.3.3 溶液的配制
    4.4 統(tǒng)計學分析
    4.5 結果
        4.5.1 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎細胞凋亡的影響
        4.5.2 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎mt DNA損傷的影響
        4.5.3 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎m RNA表達量的影響
    4.6 討論
5 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎抗氧化酶活性影響的測定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 儀器
        5.1.3 溶液的配制
        5.1.4 實驗方法
    5.2 統(tǒng)計學分析
    5.3 結果
        5.3.1 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響
        5.3.2 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎過氧化氫酶(CAT)活性的影響
        5.3.3 Cu~(2+)對斑馬魚胚胎丙二醛(MDA)活性的影響
    5.4 討論
6 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 展望
致謝
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]Cu、Cd單一及復合污染對油菜生長發(fā)育的影響[D]. 劉春艷.安徽師范大學 2012
[3]溫度和銅對鯉魚肝臟細胞超微結構的影響[D]. 劉曉暉.東北師范大學 2006



本文編號：3504810