發(fā)布時間：2021-11-06 11:29

　　MicroRNA（miRNA）在生物生理生化進程、信號傳導、細胞調(diào)亡、響應生物和非生物脅迫等方面發(fā)揮重要功能,本試驗克隆桑樹miR166f及其前體序列,分析其時空表達特性,并構(gòu)建用于瞬時表達的miR166f雙元超表達載體,為桑樹miR166f抗旱功能機制的進一步探究奠定基礎�？寺～@得了桑樹miR166f及其前體序列,pre-miR166f長91 nt,miR166f長21 nt,miR166f在前體的3′臂上,pre-miR166f最小折疊自由能（MEF）為-217.14 kJ/mol,具有典型的植物miRNA前體二級結(jié)構(gòu)特征;miR166f的5′端上游除了包含典型的具有轉(zhuǎn)錄起始功能的TATA-box和CAAT-box外,還含有多個脅迫響應順式作用元件和一些激素響應元件;qRT-PCR分析表明miR166f在桑樹不同組織中的相對表達量有較大差異,其中在莖中表達量最高,在木質(zhì)部中表達量最低;miR166f在高鹽和干旱脅迫處理條件下均上調(diào)表達,表明該基因參與了桑樹的抗逆響應過程;成功構(gòu)建了用于瞬時轉(zhuǎn)化表達的miR166f的雙元超表達載體pCAMBIA-35S-GUS-miR166f,為桑樹... 

【文章來源】：蠶業(yè)科學. 2020,46(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

桑樹miR166f在不同組織中的表達模式

從桑樹基因組中選取pre-miR166f(scaffold81)5′端上游3 000 bp的序列，利用PlantCARE在線生物信息學預測軟件對其上游序列進行分析，結(jié)果如表2所示，miR166f上游啟動子序列除了包含典型的具有轉(zhuǎn)錄起始功能的TATA-box和CAAT-box外，還含有多個與脅迫響應相關(guān)的順式作用元件，如干旱響應（MBS）、高溫應答（HSE）、抗氧化反應（ARE）、真菌誘導響應（Box-W1）和綜合防御應答（TC-rich repeats）等；另外還包含一些激素響應元件，如生長素（AuxRR-core）、茉莉酸（CGTCA-motif/TGACG-motif）、赤霉素（P-box）和水楊酸（TCA-element）等。這些結(jié)果表明桑樹miR166f可能在桑樹響應生物和非生物脅迫、調(diào)控脅迫相關(guān)基因表達方面發(fā)揮重要作用。2.4 miR166f靶基因的鑒定驗證

桑樹miR166f在干旱和高鹽等非生物脅迫處理下的表達變化情況見圖5。由圖5-A可知，桑樹miR166f對干旱脅迫的反應很強烈，隨著脅迫時間的延長，miR166f表達量逐漸增高，到第10天時達到最高值，為正常條件下的4.33倍，有極顯著差異（P≤0.01），到第15天時，表達量驟減為正常條件下的2.05倍，可以看出干旱脅迫能促使桑樹miR166f表達量的增加。在高鹽脅迫誘導下（圖5-B），桑樹miR166f的表達量先是逐漸升高，到第4天時升高到最大值，為正常條件下的7.74倍，差異極顯著（P≤0.01），之后緩慢降低，到第10天時miR166f表達量降到最低，為正常條件下的1.98倍，在整個高鹽脅迫過程中，桑樹miR166f的表達量都是高于正常條件下的，說明桑樹可以通過增加miR166f的表達量來適應高鹽脅迫。2.7 miR166f雙元超表達載體的構(gòu)建和鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]龍眼miR166家族的分子進化特性及時空表達分析[J]. 林玉玲,張清林,曾友競,陳曉慧,張梓浩,陳裕坤,賴鐘雄.  園藝學報. 2017(12)
[2]桑樹基因組計劃與桑樹產(chǎn)業(yè)[J]. 何寧佳,趙愛春,秦儉,曾其偉,向仲懷.  蠶業(yè)科學. 2012(01)

碩士論文
[1]桑樹miRn51與靶基因研究及桑樹瞬時表達體系的建立[D]. 張大燕.西南大學 2015



本文編號：3479754