目的:人呼吸道合胞病毒（Human respiratory syncytial virus,HRSV）是引起全世界嬰幼兒嚴(yán)重急性下呼吸道感染（acute lower respiratory tract infection,ALRTI）的最重要病毒性病原體之一。對(duì)2017年12月～2018年3月貴州地區(qū)嬰幼兒呼吸道合胞病毒進(jìn)行分離培養(yǎng)與基因變異分析,可以掌握貴州地區(qū)HRSV的分子流行病學(xué)特征,并對(duì)其臨床特征進(jìn)行分析,判斷基因型與臨床特征及病情的是否相關(guān),對(duì)貴州地區(qū)HRSV引起的呼吸道感染的預(yù)防控制提供重要依據(jù)。方法:收集貴州省某三甲醫(yī)院2017年12月至2018年3月收治的急性呼吸道感染患者的鼻咽分泌物。將鼻咽分泌物標(biāo)本接種到Hep-2細(xì)胞中,分離出HRSV。采用間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence assay,IFA）和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription polymerase,RT-PCR）對(duì)出現(xiàn)細(xì)胞病變（cytopathic effect,CPE）的樣本進(jìn)一步驗(yàn)證,并將PCR產(chǎn)物測(cè)序。對(duì)貴州地區(qū)HRSV分離株進(jìn)行核苷酸和... 

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HRSV病毒分離株在Hep-2細(xì)胞上的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)A:正常Hep-2細(xì)胞;B:感染的Hep-2細(xì)胞;

將上述所得的39份培養(yǎng)物進(jìn)行免疫熒光檢測(cè),在本次檢測(cè)中,在熒光顯微鏡下顯示蘋果綠熒光顏色的細(xì)胞是被HRSV病毒成功感染的細(xì)胞即陽(yáng)性細(xì)胞。熒光顯微鏡觀察結(jié)果如圖2所示,圖A是正常Hep-2細(xì)胞對(duì)照組,在熒光顯微鏡未見(jiàn)任何熒光陽(yáng)性細(xì)胞;圖B為標(biāo)本組均顯示出了蘋果綠熒光陽(yáng)性細(xì)胞。3.4 RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳鑒定

在本次實(shí)驗(yàn)中,選取經(jīng)病毒分離培養(yǎng)和免疫熒光檢測(cè)出的陽(yáng)性標(biāo)本,進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)鑒定,通過(guò)凝膠成像系統(tǒng),在紫外透射儀下觀察,根據(jù)marker條帶的大小判斷到,在500bp~750bp之間均出現(xiàn)大小與預(yù)期相符的明亮的特異性條帶。如圖3所示。3.5 基因擴(kuò)增與序列分析


本文編號(hào)：3459110