目的:探討DNA甲基化修飾對(duì)非洲爪蛙三個(gè)胚層分化的影響。方法:用30μmol/L的5-氮雜-2’-脫氧胞苷（5-AZACdR）處理胚胎,抑制早期胚胎細(xì)胞內(nèi)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT1）的活性,觀察胚胎的表型,并收集原腸期胚胎通過(guò)原位雜交檢測(cè)三胚層標(biāo)記基因的表達(dá)情況;顯微注射DNMT1特異的反義寡核苷酸（DNMT1MO）以敲降胚胎細(xì)胞內(nèi)DNMT1的表達(dá),然后通過(guò)原位雜交檢測(cè)胚層標(biāo)記基因的表達(dá)情況。結(jié)果:5-AZA-CdR處理導(dǎo)致胚胎早期發(fā)育異常,抑制中胚層標(biāo)記基因Xbra的表達(dá)。敲降DNMT1促進(jìn)背部中胚層標(biāo)記基因GSC和Chordin的表達(dá),抑制腹部中胚層標(biāo)記基因Wnt8的表達(dá)。結(jié)論:DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶參與調(diào)節(jié)非洲爪蛙三胚層分化形成的過(guò)程。 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,40(12)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

5-AZA-Cd R處理對(duì)胚胎早期發(fā)育的影響

作為維持DNA復(fù)制過(guò)程中表觀遺傳重編程和基因組穩(wěn)定性的重要調(diào)節(jié)因子，DNMT1的缺失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞特異性基因表達(dá)的變化[4]，影響印跡基因的表達(dá)、細(xì)胞周期調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖和分化。研究發(fā)現(xiàn)DNMT1能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展，在多種腫瘤細(xì)胞中用DNMT1的抑制劑5-AZA-CdR抑制DNMT1的活性，腫瘤細(xì)胞向著神經(jīng)元的方向分化并喪失惡性增殖和侵襲的能力[11]。細(xì)胞的多能性維持以及分化成為特定細(xì)胞是由外部信號(hào)以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控和表觀遺傳調(diào)控共同決定的。DNMT1對(duì)于維持所有細(xì)胞類型中的整體甲基化水平非常重要，對(duì)人胚胎干細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，敲除DNMT1后，多能性基因POU5F1、CD24等的表達(dá)下降且NODAL信號(hào)通路相關(guān)的基因NODAL,CER1,LEFTY1/2的表達(dá)被激活[12]。在小鼠中敲除DNMT1，胚胎發(fā)育至原腸期時(shí)發(fā)育停滯，DNA甲基化幾乎完全缺失，胚胎很快死亡[8]。在非洲爪蛙中敲降DNMT1，當(dāng)胚胎發(fā)育至神經(jīng)胚（st.15）時(shí)，與正常胚胎相比，胚孔不能正常閉合，缺少神經(jīng)褶[6]。圖4 敲降DNMT1對(duì)中胚層分化的影響

圖3 敲降DNMT1對(duì)胚層分化的影響綜上所述，DNMT1不僅參與胚胎干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分化命運(yùn)的決定，而且對(duì)于胚胎早期發(fā)育的過(guò)程非常重要，但是對(duì)于DNMT1在早期胚胎發(fā)育過(guò)程中三胚層分化形成這一重要環(huán)節(jié)的作用還不清楚。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組蛋白去乙�；揎棇�(duì)非洲爪蛙胚胎發(fā)育及胚層分化的影響[J]. 曹青,趙曉,康雅菲,徐西兵,劉浩,劉晨.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(08)
[2]Tcf7l1 promotes transcription of Kruppel-like factor 4 during Xenopus embryogenesis[J]. Qing Cao,Yan Shen,Wei Zheng,Hao Liu,Chen Liu.  The Journal of Biomedical Research. 2018(03)



本文編號(hào)：3454225