目的探討建立適用于SD大鼠支氣管成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法。方法取重量為150～180 g的SD雄性大鼠的支氣管組織,采用Ⅰ型膠原酶、木瓜蛋白酶聯(lián)合消化+組織塊黏附法、胰酶+膠原酶聯(lián)合消化（雙酶消化法）+組織塊黏附法、組織塊黏附法進(jìn)行原代支氣管成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。利用鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn);免疫熒光染色法鑒定細(xì)胞的類(lèi)型及純度;細(xì)胞的增殖活性用CCK-8檢測(cè)并繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。結(jié)果酶消化+組織塊黏附法培養(yǎng)使細(xì)胞游出速度更快、細(xì)胞數(shù)量產(chǎn)生更多。組織塊黏附法培養(yǎng)的細(xì)胞爬出相對(duì)緩慢、培養(yǎng)周期更長(zhǎng)、獲得的細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少。CCK8增殖曲線(xiàn)呈S形。培養(yǎng)48 h,經(jīng)酶消化法分離得到的成纖維細(xì)胞已經(jīng)游出,約有60%以上細(xì)胞已經(jīng)貼壁,培養(yǎng)6～7 d可傳代。組織塊貼壁法培養(yǎng)5 d時(shí),細(xì)胞開(kāi)始從組織塊邊緣緩慢爬出,隨后從組織塊周?chē)由扉L(zhǎng),14 d左右可傳代。使用酶消化法培養(yǎng)的支氣管成纖維細(xì)胞中可混有雜細(xì)胞團(tuán),為提高成纖維細(xì)胞的純度可通過(guò)差速貼壁法純化。結(jié)論雙酶消化法+組織塊黏附法可以更高效、快速的分離和獲取支氣管成纖維細(xì)胞,為研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）氣道重塑提供了充足的種子細(xì)胞。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)老年學(xué)雜志. 2020,40(09)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

獲取支氣管組織

酶消化法培養(yǎng)的原代支氣管成纖維細(xì)胞(×200)

組織塊貼壁法培養(yǎng)的原代支氣管成纖維細(xì)胞(×200)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3410096