目的:通過抑制乳酸產(chǎn)生相關(guān)基因丙酮酸脫氫酶激酶3（PDHK3）的表達(dá),降低CHO細(xì)胞系的乳酸表達(dá),增加CHO細(xì)胞系蛋白表達(dá)量。方法:針對PDHK3序列設(shè)計特定的shRNA質(zhì)粒,在CHO細(xì)胞系構(gòu)建過程中將含有此shRNA的質(zhì)粒與表達(dá)抗體蛋白的質(zhì)粒一同轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞中,經(jīng)過抗生素篩選后進(jìn)行批次補料生產(chǎn)抗體蛋白。測定乳酸及蛋白產(chǎn)量,同時檢測PDHK3基因的mRNA表達(dá)水平及shRNA質(zhì)粒中的neomycin基因拷貝數(shù)。結(jié)果:利用此方法分別轉(zhuǎn)染的不同抗體蛋白分子,PDHK3基因的mRNA水平降低了65.0%～76.0%,批次補料過程乳酸含量顯著降低,同時相應(yīng)的抗體蛋白表達(dá)量提升了18.6%～233.0%。結(jié)論:利用shRNA方法抑制乳酸相關(guān)的PDHK3基因的表達(dá),可以有效降低乳酸表達(dá),同時提高目的蛋白的表達(dá)。 

【文章來源】：生物化工. 2020,6(03)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

Neomycin基因拷貝數(shù)

4個分子（mAb1～mAb4）的實驗組和對照組2轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒中均含有Neomycin基因，拷貝數(shù)為4～9，見圖4。由拷貝數(shù)檢測實驗可知，PDHK3-shRNA在轉(zhuǎn)染過程及批次補料過程均有基因表達(dá)。圖2 乳酸表達(dá)量曲線

乳酸表達(dá)量曲線


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