為了得到高純度高得率的單核細(xì)胞（monocyte）并分析其在血栓發(fā)生中的作用,本研究利用10位健康人的血樣分離出單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,并通過(guò)免疫磁珠分選來(lái)獲得單核細(xì)胞,測(cè)定PBMC與單核細(xì)胞的得率。通過(guò)制備血漿中的高豐度蛋白β2GPI,并與其抗體構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物來(lái)刺激細(xì)胞培養(yǎng),通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中組織因子TF和TNF-α的含量,構(gòu)建單核細(xì)胞炎癥激活模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示單核細(xì)胞的得率較高,純度和活性較好,且β2GPI純化效果好。熒光定量PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,添加β2GPI抗原抗體復(fù)合物的實(shí)驗(yàn)組TF與TNF-αmRNA表達(dá)量明顯增多。本實(shí)驗(yàn)表明純化的單核細(xì)胞被充分激活,在細(xì)胞水平上為研究機(jī)體炎癥反應(yīng)和血栓形成的分子機(jī)理提供了炎癥模型。 

【文章來(lái)源】：生物資源. 2020,42(02)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

單核細(xì)胞原代分離照片

目前從人體外周血分離單核細(xì)胞的方法有很多，如加速紅細(xì)胞沉降法、細(xì)胞分離液不連續(xù)密度梯度分離法、貼壁法、流式分選法、免疫磁珠法、基于Fab的無(wú)痕親和細(xì)胞選擇（TACS?）技術(shù)、Colotta法、FicollHypaque密度分離法和密度梯度離心法等，各方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)。如在Ficoll-Hypaque密度分離法中，首先是以1～5倍不等體積的Hank’s液或PBS液將肝素抗凝血稀釋，然后將其疊加于LTS1077分層液上（V稀釋血液∶V血液為1∶1～4∶1），離心后獲得單個(gè)核細(xì)胞PBMC，再通過(guò)洗滌、貼壁6～12h后得到單核細(xì)胞，該法所需稀釋液及分層液較多，離心液體量較大，且分離出的細(xì)胞層次也不太理想[11,12]。貼壁法獲得的單核細(xì)胞雖耗費(fèi)時(shí)間短，成本低，但其單核細(xì)胞的純度和得率較低，因此其可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究的預(yù)試階段[15]。開(kāi)展對(duì)細(xì)胞純度要求較高的實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以選用免疫磁珠法或流式分選法，但流式分選法獲得的細(xì)胞得率較低，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，成本高，并且需要專門的技術(shù)人員操作，過(guò)程復(fù)雜[15]�；贔ab的無(wú)痕親和細(xì)胞選擇（TACS?）技術(shù)是一種相對(duì)較新的陽(yáng)性選擇技術(shù)，它使用基于CD特異性低親和力Fab片段的免疫親和層析來(lái)可逆地捕獲和釋放靶細(xì)胞，雖也可以獲得高純度高得率的單核細(xì)胞，但其更適合于研究功能參數(shù)，其在準(zhǔn)備單核細(xì)胞和進(jìn)行單核細(xì)胞衍生的DC功能分析方面起著重要作用[16]。圖3 TF與TNF-αmRNA表達(dá)水平

TF與TNF-αmRNA表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的研究進(jìn)展[J]. 陳柄全,彭漪,肖軼,彭智勇,趙吉玲,余國(guó)龍.  醫(yī)學(xué)綜述. 2019(01)
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本文編號(hào)：3404331