發(fā)布時間：2021-09-04 01:29

　　DN A甲基化,作為新型的生物檢測標志物,在人類疾病檢測和預后方面展示出巨大的應用潛能�，F(xiàn)已研發(fā)了傳統(tǒng)檢測和生物傳感器等方法實現(xiàn)了對DNA甲基化水平的檢測,但是上述檢測技術由于設備昂貴或操作過程繁瑣等缺陷,限制了它們在臨床診斷上的應用。石墨烯,因其優(yōu)良的導電性,已廣泛應用于傳感領域,尤其是以單層石墨烯為通道的場效應制備的晶體管（GFET）,因檢測靈敏度高,己實現(xiàn)了對多種生物分子的檢測。到目前為止,仍缺少關于利用GFET對DN A甲基化水平檢測的研究。因此,在本研究中,我們主要是開發(fā)一種基于GFET無標的檢測方法實現(xiàn)對DN A甲基化的檢測。本研究中,我們選取谷胱甘肽巰基轉移酶（GSTP1）啟動子區(qū)域中中的一段序列,將該序列中的胞嘧啶進行不同數(shù)目和不同位點的甲基化修飾后,作為本實驗的目的序列。首先,為了 了解不同甲基化水平修飾的目的序列與DN A探針反應的動力學,我們利用實時熒光定量PCR技術,對不同甲基化修飾水平的目的序列與DNA探針的雜交過程進行系統(tǒng)的分析:同時利用熒光淬滅原理,觀測不同甲基化修飾水平的序列對DN A探針鏈置換反應速率的影響。結果表明:無論足與DN A探針的雜交還是鏈置... 

【文章來源】：內蒙古農業(yè)大學內蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２?甲基化異常對ＤＮＡ轉錄的影響??Ｆｉｇ．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｍｃｔｈｙｌａｔｉｏｎ?ｏｎ?ＤＮＡ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??注：圖片引自參務文獻１５

異位點的過甲基化是癌細胞的兩個重要特征。低甲基化主要是導致了細胞內原癌??基因的異常激活、印跡基因的缺失或者基因組的不穩(wěn)定而引發(fā)了癌癥的發(fā)生；過??甲基化主要是導致了抑癌基因和ＤＮＡ修復基因的失活而引發(fā)了癌癥（圖３?）Ｕ６－３７］。??閃此，人們Ｌｉ經(jīng)將ＤＮＡ甲基化的水平用于癌癥的篩查、分類、預后和癌癥治療??監(jiān)測等領域。??Ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅ?９?ｔ?ｔ?＊?卜??肴?Ｉ?１?｜?Ｉ?１?Ｉ?１?，?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ???／／???＾一＾??ＬＬＬＬ＾?ＴＳＧ?；???Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?七」?ＣｐＧ?ｉｓｌａｎｄ??ｐｅｒｉｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃ?（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）??ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ??Ｉ?Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ?Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ??▼?＾??Ｍｉｔｏｔｉｃ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，??ｇｅｎｏｍｉｃ?ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｌｏｓｓ?ｏｆ?ＴＳＧ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??？?ＤＮＡ?ｔｅｐｅａ！?＇?．??Ｉ?Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??麗?Ｕｎｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??圖３?ｄｎａ序列的過甲基化和去甲基化與癌癥引發(fā)的關系??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?Ｉ）Ｎ八（ｌｉｙｐｏ／ｈｙｐｃｉ．）?ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｈｕｍａｎ?ｃａｎｃｅｒ??注：屬片闢自參芩殳獻１６。??Ｈ的

１．３?傳統(tǒng)方式對ＤＮＡ甲基化的檢測??在過去的２０年里，人們己經(jīng)開發(fā)出多種用于檢測生物組織或者體液中ＤＮＡ??甲基化水平的技術［５”，所有的方法均需要通過以下三個步驟來完成（圖４）。簡??介如下：首先，通過亞硫酸氫鈉轉化法＿、中基敏感型限制性內切酶酶切法和特異??性親和吸附純化等三種方法實現(xiàn)ＤＮＡ甲基化序列的分離。其中亞硫酸氫鈉轉化??法使用的最為廣泛，該種方法主要是依賴于亞硫酸氫鈉能夠將Ｃ轉化成尿嘧啶??（Ｕ）


本文編號：3382278