作為遺傳信息的主要載體,DNA在生命系統(tǒng)中具有重要的傳遞信息作用,目前有等溫?cái)U(kuò)增、微陣列、熒光雜交核酸探針、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）等方法可以檢測(cè)樣品中DNA的種類及含量。由于物理和基因疾病的影響,人類DNA序列會(huì)發(fā)生各種各樣的變異導(dǎo)致基因分型,DNA或RNA序列中單堿基變異可能導(dǎo)致嚴(yán)重的生理后果,因此開發(fā)新的檢測(cè)手段用于區(qū)分單核苷酸水平上的DNA序列就變得十分重要。我們合理地設(shè)計(jì)雜交探針,提高雜交探針選擇性識(shí)別SNV的能力。一個(gè)理想的探針可以只與目標(biāo)鏈雜交,而不與突變鏈雜交,為了構(gòu)建這種程序化的催化信號(hào)放大體系,我們?cè)谖⒚坠懿▽?dǎo)檢測(cè)平臺(tái)的基礎(chǔ)上,將催化harpin探針自組裝體系（CHA）與競(jìng)爭(zhēng)抑制體系結(jié)合,對(duì)let-7家族中的let-7a、let-7c、let-7e、let-7f進(jìn)行區(qū)分。我們證明了在這種復(fù)合體系下miRNA與探針選擇性雜交的效率高于單一體系,區(qū)分因子提高了10倍左右,檢測(cè)極限低至15fM。最后,我們使用該體系對(duì)胰腺癌、肺癌、卵巢癌和胃癌患者的血清進(jìn)行直接檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明放大-競(jìng)爭(zhēng)體系的微米管平臺(tái)可以靈敏的區(qū)分出健康人與病人的血清,并且可以對(duì)患者類型進(jìn)行初步診斷分析... 

【文章來源】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?ＳＹＢＲ?Ｇｒｅｅｎ染料插入雙鏈ＤＮＡ??

圖１．２?ＴａｑＭａｎ探針法??

３丨丨丨丨丨１１丨丨丨丨丨１丨丨山?丨＂丨！丨１丨丨丨！＂丨丨丨丨丨丨ｉ�。椋。樨┴�??圖１．２?ＴａｑＭａｎ探針法??１．３．１．２鏈置換放大（ＳＤＡ）??在生物體中，堿基切除修復(fù)是通過切開受損磷酸二酯鍵完成的，缺失的部分??由ＤＮＡ聚合酶重新合成，ＤＮＡ連接酶密封切口。ＳＤＡ利用這一反應(yīng)過程，使??ＰＣＲ擴(kuò)增反應(yīng)可以在恒溫下進(jìn)行�；玖鞒虨椋阂铮痹冢怠擞幸粋�(gè)突起，用??于識(shí)別Ｈｉｎｄｉ核酸外切酶；引物２用來連接引物１的兩端。每一個(gè)熱變形的ｓｓＤＮＡ??模板都會(huì)連接２個(gè)不同的引物，引物１在ＥｓｃｈｅｒｉｃｉａｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶的作用下向??著ＨｉｎｃＩＩ核酸外切酶的識(shí)別位點(diǎn)延伸，同時(shí)引物２聚合取代引物１端起始的新??鏈，取代的鏈在下一輪循環(huán)中作為模板。第二輪循環(huán)中，在Ｈｉｎｄｉ識(shí)別序列兩端??產(chǎn)生的雙鏈１Ｃ分子，最終合為一體。核酸外切酶繼續(xù)剪切末端，ｅｘｏ＿?Ｋｌｅｎｏｗ引??發(fā)聚合


本文編號(hào)：3348788