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玉米SDG108基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥

發(fā)布時間:2021-07-14 12:05
  為研究玉米組蛋白賴氨酸甲基化基因SDG108的功能,本實驗克隆了全長為6 789 bp的玉米SDG108基因,該基因編碼2 262個氨基酸,并構(gòu)建重組質(zhì)粒載體,采用浸花法將重組質(zhì);蜣D(zhuǎn)入到擬南芥野生型內(nèi),通過除草劑、PCR和試紙條對抗性植株進行鑒定,共篩選出了7株陽性擬南芥植株。對陽性擬南芥植株后代進行表型鑒定及基因表達量鑒定。結(jié)果表明,與野生型相比轉(zhuǎn)基因擬南芥開花時間提前,蓮座葉直徑增大,葉片長度、寬度及葉柄長度均有所增加;葉片數(shù)量減小,一級分枝數(shù)無明顯差異;虮磉_方面,轉(zhuǎn)化株的FLC基因表達量下降,SOC1基因表達量上升。研究結(jié)果揭示了SDG108基因?qū)M南芥在開花及蓮座葉片表型方面的影響。 

【文章來源】:分子植物育種. 2020,18(24)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】:7 頁

【部分圖文】:

玉米SDG108基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥


4周時野生型擬南芥與過表達SDG108植株葉片大小比對

過表達,植株,表型,野生型


本實驗中,我們在擬南芥中過表達SDG2的玉米同源基因SDG108,同樣產(chǎn)生了蓮座葉片增大的表型,這說明玉米SDG108與擬南芥SDG2參與基因表達調(diào)控的方式可能是類似的;但沒有在轉(zhuǎn)化后代中發(fā)現(xiàn)育性的變化,推測可能是H3K4組蛋白甲基化對基因表達的作用具有特異性,對于某些基因位點過度的H3K4甲基化可能并不影響基因表達,這還需要進一步試驗來證實。圖5 野生型擬南芥與過表達SDG108擬南芥中成花關(guān)鍵基因的表達分析

擬南芥,過表達,基因,野生型


圖4 野生型植株與過表達SDG108植株的表型對比已有實驗證明,SDG108在水稻中的同源基因SDG701無論在長日照還是短日照的條件下過表達SDG701均表現(xiàn)開花提前的表型,這一過程是通過SDG701蛋白直接結(jié)合在成花素基因Hd3a和RFT1上,并通過建立H3K4me3修飾,促進這些成花素基因的表達來實現(xiàn)的(Liu et al.,2017)。水稻SDG701在玉米中的同源基因為SDG108,在本實驗中,在擬南芥中過表達SDG108,也使擬南芥同樣出現(xiàn)了長日照下的早花表型。通過熒光定量PCR分析,確定了玉米SDG108基因的過表達會導(dǎo)致擬南芥內(nèi)源開花調(diào)控途徑中行使阻遏功能的FLC基因表達量的降低,和其下游行使促進功能的SOC1基因表達量的增加。有實驗表明,F(xiàn)LC是SOC1的調(diào)控基因,F(xiàn)LC表達量的升高會對下游基因SOC1的表達起到抑制作用(Crevillén and Dean,2011)。所以,SDG108是同時作用于FLC和SOC1,還是通過作用于FLC來調(diào)控SOC1的表達還有待進一步的研究。

【參考文獻】:
期刊論文
[1]玉米ZmGS5基因的克隆及其對轉(zhuǎn)基因擬南芥種子發(fā)育的影響[J]. 何春梅,王娟,董瑞,劉春曉,劉強,關(guān)海英,汪黎明,徐相波,劉鐵山.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2019(04)
[2]表觀遺傳學(xué)修飾的遺傳模式及其研究進展[J]. 沈雙,路則明,金景姬,蔡勇.  科學(xué)通報. 2016(36)
[3]植物組蛋白賴氨酸化修飾參與基因表達調(diào)控的機理[J]. 施子晗,李澤琴,張根發(fā).  遺傳. 2014(03)
[4]改良異硫氰酸胍一步法提取紅豆杉細胞RNA[J]. 胡國斌,梅興國,劉怡.  生物技術(shù). 2001(05)



本文編號:3284114

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