靈芝是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥,其含有的活性成分主要是靈芝多糖與靈芝三萜類化合物�，F(xiàn)在市面上存在大量的靈芝類保健品,添加了靈芝成分的化妝品、護(hù)膚品等,隨著社會(huì)壓力與人口老齡化的加劇,各個(gè)年齡段的人群對(duì)健康都日益重視。隨著對(duì)靈芝的藥理功效等的研究越來(lái)越深入透徹,以及人們對(duì)于藥食同源等理念愈加廣泛的接受,可以預(yù)見(jiàn)未來(lái)市場(chǎng)對(duì)于靈芝產(chǎn)品的需求也將會(huì)更加旺盛。因此科研與產(chǎn)業(yè)都急需要高品質(zhì)的原材料原料用于產(chǎn)品的研發(fā),然而由于近年來(lái)靈芝的育種技術(shù)缺乏創(chuàng)新,導(dǎo)致市場(chǎng)需要的高多糖含量的專用種質(zhì)資源十分匱乏。所以本論文擬以高多糖的菌株為出發(fā)菌株,利用紫外和ARTP誘變技術(shù),對(duì)出發(fā)菌株的原生質(zhì)體進(jìn)行誘變處理,以獲得高多糖的誘變菌株。本論文的取得生物主要研究成果如下:（1）優(yōu)化出優(yōu)良出發(fā)菌株的篩選與原生質(zhì)體制備條件對(duì)于出發(fā)菌株進(jìn)行了原生質(zhì)體的優(yōu)化與原生質(zhì)體活力的鑒定,得到原生質(zhì)體最佳制備條件為菌絲體第8天,酶解時(shí)間為3h,酶解溫度為31℃,收集原生質(zhì)體離心力為1811g,該條件下制備的原生質(zhì)體濃度達(dá)到1.3×10⁸,且經(jīng)過(guò)染色鑒定原生質(zhì)體活力證實(shí)活力良好,在普通再生平板上的原生質(zhì)體的再生率可達(dá)... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

0株供試菌株的多糖含量

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖2-2培養(yǎng)時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體再生率的影響Fig.2-2Effectofculturetimeonprotoplastregenerationrate2.3.3酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體再生率的影響通過(guò)圖2-3可以看出，在顯微鏡下觀察，當(dāng)菌絲體酶解時(shí)間為2.5h時(shí)，菌絲體還沒(méi)有完全被酶解，殘留的菌絲體清晰可見(jiàn)；當(dāng)酶解時(shí)間為3h時(shí)，菌絲體酶解比較充分，原生質(zhì)體大小一致；當(dāng)酶解時(shí)間為3.5h時(shí)，原生質(zhì)體的大小出現(xiàn)差異，肉眼可見(jiàn)原生質(zhì)體聚集；當(dāng)酶解時(shí)間為4h時(shí)，原生質(zhì)體懸液開(kāi)始出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。結(jié)合圖2-4可知，當(dāng)酶解時(shí)間為3h時(shí)，G157菌株的原生質(zhì)體再生率最高，為2.97‰，所以選取酶解時(shí)間3h為G157菌株的最佳酶解時(shí)間。

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖2-3顯微鏡觀察不同酶解時(shí)間下的原生質(zhì)體（×100）Fig.2-3Microscopeobservationofprotoplastsatdifferentenzymolysistimes（×100）圖2-4不同酶解時(shí)間、轉(zhuǎn)速對(duì)原生質(zhì)體再生率的影響Fig.2-4Effectofdifferentenzymolysistime、rotationalspeedsonprotoplastregenerationrate2.3.4離心力對(duì)原生質(zhì)體再生率的影響由圖2-4可以看出當(dāng)轉(zhuǎn)速為3000rpm/min（離心力為1811g）時(shí)，原生質(zhì)體的再生率最高，為4‰，此時(shí)制備的原生質(zhì)體濃度達(dá)到2.09×108。結(jié)合菌絲體培養(yǎng)時(shí)間與酶解時(shí)間可知，當(dāng)菌絲體培養(yǎng)時(shí)間為7d-10d，酶解時(shí)間3h，離心收集原生質(zhì)體的離心力為1811g時(shí)，原生質(zhì)體的再生率最佳。2.3.5正交試驗(yàn)的結(jié)果根據(jù)單因素分析，確定酶解時(shí)間2.5h、3h、3.5h，轉(zhuǎn)速2500rpm(1258g)、3000rpm(1811g)、3500rpm(2465g)，生長(zhǎng)時(shí)間為6、8、10天為三因素三水平的正交試驗(yàn)。表2-1田口正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果Table2-1DesignandResultsofTaguchiOrthogonalExperiment酶解時(shí)間(h)轉(zhuǎn)速(rpm/rcf)天數(shù)(d)再生率(‰)2.5250060.36±0.0122.5300081.24±0.0212.53500101.14±0.0153250082.78±0.01433000103.12±0.0233350062.76±0.0183.52500101.85±0.0163.5300062.78±0.0203.5350083.04±0.019

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靈芝新品種康定靈芝選育研究[J]. 唐明先,陳杭,羅孝貴,何曉蘭,羊玉蓉,馬薇,戴旭光,降初拉爾布.  中國(guó)食用菌. 2018(05)
[2]紫外-ARTP復(fù)合誘變選育達(dá)巴萬(wàn)星前體高產(chǎn)菌株[J]. 王小連,郄麗萍,馬婕,代明偉,鄧佩佩.  化學(xué)與生物工程. 2017(12)
[3]采用近紅外漫反射光譜進(jìn)行牛樟芝菌絲體組分檢測(cè)的研究[J]. 初秋博,趙毅,劉燕隔,張?jiān)?周毓麟.  藥物分析雜志. 2017(10)
[4]紫外照射對(duì)靈芝菌絲體多糖的影響[J]. 張帥,黃嘉玲,林怡麗,程昊.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(08)
[5]常壓室溫等離子體（ARTP）誘變技術(shù)選育柱狀田頭菇（茶樹菇）優(yōu)良菌株研究初探[J]. 王謙,黃媛媛,宋長(zhǎng)林.  菌物學(xué)報(bào). 2017(06)
[6]基于近紅外漫反射光譜的云芝提取物多糖含量快速檢測(cè)研究[J]. 張鈺瑩,王星麗,涂紅艷,瞿亮,邵平.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(04)
[7]基于ARTP誘變和高通量篩選的綠針假單胞菌GP72育種方法[J]. 江耀祖,彭華松,張雪洪.  微生物學(xué)通報(bào). 2017(10)
[8]敞開(kāi)式離子化質(zhì)譜技術(shù)在中草藥研究中的應(yīng)用[J]. 黃鑫,劉文龍,張勇,劉淑瑩.  質(zhì)譜學(xué)報(bào). 2017(01)
[9]靈芝菌絲體及發(fā)酵液中三萜化合物的研究進(jìn)展[J]. 張容容,陳慧,劉高強(qiáng),王曉玲.  食用菌學(xué)報(bào). 2016(03)
[10]鈣離子和水楊酸誘導(dǎo)靈芝多糖和三萜的合成[J]. 葉麗云,林強(qiáng),劉梅,吳小平.  菌物學(xué)報(bào). 2017(02)

博士論文
[1]等離子體誘變靈芝及其藥用成分的紅外光譜分析[D]. 馬玉涵.中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2018
[2]基于多尺度創(chuàng)新原理的工業(yè)微生物高通量篩選平臺(tái)構(gòu)建及應(yīng)用研究[D]. 譚俊.華東理工大學(xué) 2013

碩士論文
[1]靈芝多糖合成途徑關(guān)鍵酶基因過(guò)表達(dá)的研究[D]. 李瑞勤.江南大學(xué) 2017
[2]靈芝菌絲體培養(yǎng)中多糖組分的變化與相關(guān)酶活性分析[D]. 王瓊.江南大學(xué) 2013
[3]草菇60Co誘變育種研究[D]. 林瑞蝦.福建農(nóng)林大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3247085