目的:構(gòu)建在哺乳動物細(xì)胞中表達的-Omi/HtrA2基因融合表達載體,為后續(xù)研究Omi/HtrA2基因過表達對結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的影響奠定基礎(chǔ)。方法:PCR擴增HtrA2基因編碼框,用KpnI和BamHI將TS-HtrA2及目的載體pEC3.1（+）兩步法雙酶切,然后進行連接轉(zhuǎn)化,構(gòu)建基因重組載體radE5-HtrA2,包裝重組腺病毒,RT-PCR檢測重組腺病毒基因mRNA的表達并提取蛋白進行Westernblot檢測。結(jié)果:重組真核表達載體radE5-HtrA2經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析,雙酶切之后的條帶與理論值相符,測序結(jié)果未見堿基變異,提取轉(zhuǎn)染后細(xì)胞總蛋白進行Westernblot檢測,可測到目標(biāo)條帶。結(jié)論:成功構(gòu)建了基因重組載體radE5-HtrA2,并能在結(jié)腸癌細(xì)胞HT29中正常表達,為后續(xù)研究Omi/HtrA2基因功能奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：科技視界. 2020,(16)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

HtrA2 RT-PCR結(jié)果

Western顯影

圖4 雙酶切radE5-HtrA2電泳圖譜

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠CD47 RNAi腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 曾萍,楊簡,楊俊,劉曉雯,王輝波,蔡婉垠.  臨床心血管病雜志. 2017(09)
[2]Lgr5蛋白和Her-2蛋白在結(jié)腸癌中的表達及其臨床意義[J]. 程雪,紀(jì)捷,張靜敏,王建軍,樊祥山.  現(xiàn)代醫(yī)學(xué). 2017(01)
[3]腹腔鏡完整結(jié)腸系膜切除（CME）治療局部晚期右半結(jié)腸癌的臨床療效[J]. 王勇,傅贊,封益飛,張冬生,孫躍明.  中國地方病防治雜志. 2016(11)
[4]Raf-1基因重組腺病毒siRNA載體構(gòu)建及其對大鼠心肌細(xì)胞肥大的影響[J]. 鄭亞萍,劉春杰.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)
[5]Omi/HtrA2表達與腫瘤關(guān)系的研究進展[J]. 饒冬梅.  廣東醫(yī)學(xué). 2016(08)
[6]Omi/HtrA2及其在惡性腫瘤中的研究進展[J]. 耿樂樂,陳彥平.  河北醫(yī)藥. 2015(16)
[7]中國人群結(jié)直腸癌疾病負(fù)擔(dān)分析[J]. 張玥,石菊芳,黃慧瑤,任建松,李霓,代敏.  中華流行病學(xué)雜志. 2015 (07)

碩士論文
[1]結(jié)腸癌組織NPRL2表達及其臨床意義研究[D]. 王千里.鄭州大學(xué) 2014



本文編號：3209294