目的:研究miR-34b/c、miR-449在維持輸出小管正常結(jié)構(gòu)與功能中發(fā)揮的作用,探索miR-34b/c^-/-、miR-449^-/-雙敲除小鼠不育的分子機(jī)制。方法:HE染色對(duì)小鼠輸出小管形態(tài)進(jìn)行觀察;利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)野生型小鼠和miR-34b/c^-/-、miR-449^-/-雙敲除小鼠輸出小管基因表達(dá)進(jìn)行分析,從中篩選出miR-34b/c、miR-449可能的靶基因與差異表達(dá)基因進(jìn)行聯(lián)合分析;qRT-PCR法驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。結(jié)果:雙敲除小鼠輸出小管形態(tài)異常;與野生型小鼠相比,雙敲除小鼠輸出小管中參與纖毛等結(jié)構(gòu)形成以及水、離子、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等活動(dòng)的基因表達(dá)顯著下降。結(jié)論:miR-34b/c、miR-449的缺失導(dǎo)致雙敲除小鼠輸出小管結(jié)構(gòu)異常,輸出小管纖毛運(yùn)動(dòng)與重吸收功能障礙,導(dǎo)致雙敲除小鼠不育。 

【文章來(lái)源】：中華男科學(xué)雜志. 2020,26(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 小鼠基因型鑒定
    1.4 小鼠輸出小管HE染色
    1.5 組織樣本采集
    1.6 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析
        1.6.1 基因文庫(kù)的構(gòu)建與測(cè)序
        1.6.2 測(cè)序數(shù)據(jù)分析
    1.7 靶基因預(yù)測(cè)與分析
    1.8 qRT-PCR驗(yàn)證mRNA表達(dá)水平
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 小鼠基因型鑒定
    2.2 小鼠輸出小管形態(tài)學(xué)觀察
    2.3 測(cè)序結(jié)果與分析
        2.3.1 差異表達(dá)基因檢測(cè)
        2.3.2 差異表達(dá)基因GO功能分析
        2.3.3 DEG的KEGG通路分析
        2.3.4 靶基因聯(lián)合分析
    2.4 qRT-PCR驗(yàn)證
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)錄組研究新技術(shù):RNA-Seq及其應(yīng)用[J]. 祁云霞,劉永斌,榮威恒.  遺傳. 2011(11)



本文編號(hào)：3176177