選題依據(jù):遠(yuǎn)志是我國(guó)重要的大宗藥材,同時(shí)也是山西的道地藥材。作為遠(yuǎn)志的主要活性成分之一,遠(yuǎn)志皂苷具有抗癡呆、改善記憶障礙及腦保護(hù)等藥理作用。但是,由于遠(yuǎn)志皂苷屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷,其糖苷配基種類(lèi)多樣、結(jié)構(gòu)復(fù)雜,具有多個(gè)手性中心,導(dǎo)致從單個(gè)糖苷配基衍生出的皂苷結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜繁多,僅從原遠(yuǎn)志皂苷元衍生而出的皂苷就有50余種。從遠(yuǎn)志藥材中直接提取遠(yuǎn)志皂苷,面臨著有效成分含量低、藥材資源有限、難以純化等諸多弊端;而通過(guò)全化學(xué)途徑合成,由于涉及多步純化,步驟繁瑣,難以保證較高產(chǎn)率;若通過(guò)植物組織培養(yǎng)的方式獲得遠(yuǎn)志皂苷,又面臨著操作周期長(zhǎng)且復(fù)雜,不易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。合成生物學(xué)的出現(xiàn),特別是利用釀酒酵母進(jìn)行萜類(lèi)化合物的異源生物合成為遠(yuǎn)志皂苷的獲得提供新方法。釀酒酵母生長(zhǎng)速度快,易于基因工程操作,適合大規(guī)模培養(yǎng),工業(yè)化控制簡(jiǎn)便,尤其是其能提供天然的合成萜類(lèi)的前體2,3-氧化角鯊烯,為通過(guò)改造釀酒酵母異源生物合成萜類(lèi)提供便利。本課題組前期驗(yàn)證了一個(gè)合成遠(yuǎn)志皂苷前體齊墩果酸的細(xì)胞色素P450單加氧酶CYP716A249（cytochrome P450 monooxygenase CYP716A2... 

【文章來(lái)源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 立題背景及意義
    1.2 本課題的研究?jī)?nèi)容、技術(shù)路線(xiàn)圖及創(chuàng)新點(diǎn)
        1.2.1 研究?jī)?nèi)容
        1.2.2 技術(shù)路線(xiàn)圖
        1.2.3 創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 文獻(xiàn)綜述
    2.1 植物三萜生物合成相關(guān)P450s的研究進(jìn)展
    2.2 P450s介導(dǎo)齊墩果烷型植物三萜生物合成的研究進(jìn)展
        2.2.1 催化β-香樹(shù)脂醇的P450s
        2.2.2 催化齊墩果酸的P450s
    2.3 P450s介導(dǎo)遠(yuǎn)志皂苷生物合成的研究進(jìn)展
        2.3.1 遠(yuǎn)志皂苷生物合成途徑解析的必要性
        2.3.2 遠(yuǎn)志皂苷生物合成途徑解析的復(fù)雜性
        2.3.3 遠(yuǎn)志皂苷生物合成途徑解析的可行性
    2.4 萜類(lèi)成分的合成生物學(xué)研究概況
    2.5 基因組裝技術(shù)在構(gòu)建齊墩果酸生物合成途徑中的應(yīng)用
        2.5.1 基因組裝技術(shù)概述
        2.5.2 釀酒酵母基因同源重組技術(shù)解析
第三章 構(gòu)建目的基因在釀酒酵母體內(nèi)的基因同源重組表達(dá)元件
    3.1 構(gòu)建合成齊墩果酸前體β-香樹(shù)脂醇的基因表達(dá)元件
        3.1.1 材料與儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.2 構(gòu)建提供電子的細(xì)胞色素P450 還原酶基因同源重組表達(dá)元件
        3.2.1 材料與儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 構(gòu)建合成齊墩果酸的基因同源重組表達(dá)元件
        3.3.1 材料與儀器
        3.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 構(gòu)建過(guò)表達(dá)釀酒酵母內(nèi)源基因ERG20 的基因同源重組表達(dá)元件
        3.4.1 材料與儀器
        3.4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.5 小結(jié)與討論
第四章 構(gòu)建產(chǎn)齊墩果酸的釀酒酵母菌株
    4.1 構(gòu)建產(chǎn)β-香樹(shù)脂醇的釀酒酵母菌株
        4.1.1 菌株、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.2 構(gòu)建產(chǎn)齊墩果酸的釀酒酵母菌株
        4.2.1 菌株、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.3 構(gòu)建過(guò)表達(dá)釀酒酵母內(nèi)源基因ERG20 的釀酒酵母菌株
        4.3.1 菌株、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        4.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 不同基因表達(dá)元件構(gòu)建方式對(duì)釀酒酵母體內(nèi)齊墩果酸積累的影響
    5.1 齊墩果酸合酶等基因在釀酒酵母中的mRNA表達(dá)量分析
        5.1.1 菌株、材料與儀器
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.2 釀酒酵母中齊墩果酸等代謝物的定量分析
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.3 小結(jié)與討論
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 研究工作總結(jié)
    6.2 不足與展望
縮寫(xiě)詞表
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]天然五環(huán)三萜及其衍生物抗心腦血管疾病的研究進(jìn)展[J]. 白雪,王雪,南敏倫,李川晶,趙昱瑋,赫玉芳,趙全成.  中草藥. 2019(03)
[2]植物天然產(chǎn)物合成生物學(xué)研究[J]. 戴住波,王勇,周志華,李盛英,張學(xué)禮.  中國(guó)科學(xué)院院刊. 2018(11)
[3]創(chuàng)建釀酒酵母細(xì)胞工廠(chǎng)高效生產(chǎn)人參皂苷前體達(dá)瑪烯二醇Ⅱ[J]. 王冬,劉怡,許驕陽(yáng),王金鶴,戴住波,張學(xué)禮,黃璐琦.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2018(08)
[4]齊墩果酸通過(guò)抑制NF-κB/ICAM-1信號(hào)通路減輕大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的研究[J]. 劉秀娟,韓雨薇,李曉明.  中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué). 2017(09)
[5]不同物候期栽培遠(yuǎn)志的數(shù)字基因表達(dá)譜分析[J]. 許曉雙,薛英,張福生,秦雪梅,彭冰,田洪嶺,曾祖平.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2016(07)
[6]DNA克隆和組裝技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 史晏榕,孫宇輝.  微生物學(xué)通報(bào). 2015(11)
[7]三萜皂苷生物合成途徑及關(guān)鍵酶的研究進(jìn)展[J]. 許曉雙,張福生,秦雪梅.  世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2014(11)
[8]齊墩果酸酵母細(xì)胞工廠(chǎng)的合成途徑與發(fā)酵工藝優(yōu)化[J]. 王冬,王貝貝,劉怡,施明雨,肖冬光,黃璐琦,戴住波,張學(xué)禮.  中國(guó)中藥雜志. 2014(14)
[9]中藥遠(yuǎn)志改善記憶障礙研究進(jìn)展[J]. 莫微,林志宏.  世界科學(xué)技術(shù)(中醫(yī)藥現(xiàn)代化). 2012(04)
[10]遠(yuǎn)志皂苷對(duì)AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及中樞膽堿能系統(tǒng)標(biāo)志酶活性的影響[J]. 陳慶林,陳勤,金蓓蓓.  中藥藥理與臨床. 2011(03)

博士論文
[1]β-香樹(shù)醇酯奈基三唑衍生物對(duì)人鼻咽癌抗癌作用機(jī)制的研究[D]. 李臻.山東大學(xué) 2018
[2]釀酒酵母中β-香樹(shù)脂醇合成途徑的構(gòu)建與調(diào)控[D]. 張根林.北京理工大學(xué) 2015
[3]遠(yuǎn)志和華南遠(yuǎn)志的化學(xué)成分及其生物活性研究[D]. 李創(chuàng)軍.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2008

碩士論文
[1]遠(yuǎn)志皂苷生物合成中CYP450s、UGTs的篩選及遠(yuǎn)志對(duì)hDDC酶抑制作用初探[D]. 許曉雙.山西大學(xué) 2016
[2]基于UPLC/Q-TOF MS代謝組學(xué)和DGE轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)研究遠(yuǎn)志中三萜皂苷的生物合成規(guī)律[D]. 薛英.山西大學(xué) 2015
[3]基于高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與植物代謝組學(xué)技術(shù)研究遠(yuǎn)志皂苷生物合成途徑[D]. 李曉偉.山西大學(xué) 2014
[4]構(gòu)建人工酵母細(xì)胞生產(chǎn)β-胡蘿卜素和齊墩果酸[D]. 王貝貝.天津科技大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3149950