為進一步鑒定橡膠樹翻譯控制腫瘤蛋白（HbTCTP）與橡膠延伸因子1 （HbREF1）互作的分子區(qū)域,構建Hb TCTP及其截短體的誘餌載體。本研究利用RT-PCR技術從橡膠樹膠乳中擴增出包含HbTCTP不同結(jié)構域的片段,克隆到p GBKT7表達載體,通過酶切、菌落PCR和測序鑒定后,轉(zhuǎn)化酵母Y2HGold感受態(tài)細胞,檢測誘餌蛋白是否具有自激活作用和毒性。結(jié)果顯示,成功構建6個包含HbTCTP不同結(jié)構域的誘餌載體,且誘餌載體對酵母宿主細胞無毒性和無自主激活報告基因的功能。本研究結(jié)果為進一步篩選HbTCTP與HbREF1互作的分子區(qū)域及闡明HbTCTP的功能提供科學依據(jù)。 

【文章來源】：分子植物育種. 2020,18(16)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Hb TCTP及其截短體的PCR產(chǎn)物

重組質(zhì)粒酶切鑒定

將轉(zhuǎn)化重組誘餌質(zhì)粒和pGBKT7質(zhì)粒的Y2HG-lod菌液稀釋后涂布于SDO固體平板上，30℃培養(yǎng)3～5 d后，SDO平板上轉(zhuǎn)化重組誘餌質(zhì)粒的酵母菌落個數(shù)和轉(zhuǎn)化空載體的菌落個數(shù)基本相同，菌落直徑均大于2 mm。分別挑取SDO平板上生長的酵母菌落，接種于SDO液體培養(yǎng)基中，30℃搖菌培養(yǎng)24 h后測得其OD600均大于0.8(表1)，說明重組誘餌質(zhì)粒對酵母細胞沒有毒性，以上結(jié)果表明構建的誘餌載體可用于下一步HbTCTP與HbREF1互作區(qū)域酵母雙雜交篩選。2 討論

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3139296