ACYL-ACYL CARRYIER PROTEIN DESATURASEs（AADs）在植物細胞中特異地催化硬脂酸（C18:0）轉(zhuǎn)化為油酸（C18:1）。前人的研究表明,AAD在擬南芥中共有7個成員,它們分別為:AtSSI2、AtAAD1、AtAAD2、AtAAD3、AtAAD4、AtAAD5和AtAAD6。除AtAAD5外,擬南芥其他AAD家族成員在脂肪酸積累及抗逆境脅迫等方面的功能均已有較為深入的研究。此外,油菜中AAD5基因的功能仍不清楚。鑒于此,本文首先研究了AtAAD5在擬南芥中的時空表達模式以及對種子脂肪酸積累的影響;利用生物信息學方法分析比較了AAD5在十字花科植物及主要油料作物中的親緣關(guān)系;從甘藍型油菜自交系品種L111中克隆了與AtAAD5序列親緣關(guān)系最相近的BnAAD5-1基因的全長編碼區(qū),構(gòu)建了其過表達載體并成功轉(zhuǎn)入對應的擬南芥突變體aad5-2中,獲得aad5-2 35S:BnAAD5-1純合轉(zhuǎn)基因株系。在此基礎上,我們分析比較了AtAAD5及BnAAD5-1在種子脂肪酸合成積累方面的功能。本研究獲得的主要研究結(jié)果如下:（1）構(gòu)建了pAtAAD5:GUS載體并... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥種子發(fā)育過程示意圖（引自Baudetal.2008）

圖 2.1 本試驗構(gòu)建的兩種質(zhì)粒載體示意圖Figure 2.1 Schematic diagram of two plasmid constructed in this experiment如圖 2.1 所示為本研究中構(gòu)建的兩個質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)示意圖。圖 2.1 A 為pAtAAD5:GUS 載體示意圖，利用限制性內(nèi)切酶 Hind III 和 Xma I 將 AtAAD5 基因啟動子連在質(zhì)粒中 GUS 基因之前，可以在 AtAAD5 基因本身特定的組織時期表達 GUS 基因，方便我們檢測；圖 2.1 B 為過表達載體示意圖，利用 Xma I 和 Spe I 內(nèi)切酶將 BnAAD5-1基因連入過表達質(zhì)粒載體中，轉(zhuǎn)化入植物中后可以在擬南芥各個組織時期過量表達。兩種雙元質(zhì)粒載體均帶有卡那抗性和 Basta 抗性基因以便于篩選。2.5.3.1 PCR 擴增AtAAD5 基因啟動子的 PCR 擴增：用前文表 1 中給出的引物克隆 AtAAD5 啟動子和BnAAD5-1 基因 CDS，分別以的擬南芥 Col-0 野生型 Genomic DNA 和甘藍型油菜 L111自交系 cDNA 作為模板克隆目標序列基因。本試驗使用 Takara 公司 PrimerStar Taq 高保真酶進行 PCR 擴增。

第二章 材料與方法第三章 結(jié)果與分析 AtAAD5 基因的表達模式分析前人研究表明 AtAAD5 基因在擬南芥各個組織包括根、莖、葉片、花、角果中廣（Kachroo et al. 2007），為了進一步驗證該基因在野生型擬南芥中的時空表達模構(gòu)建了 pAtAAD5:GUS 載體并成功轉(zhuǎn)化入擬南芥野生型 Col-0 中，共獲得 19 個AD5:GUS 轉(zhuǎn)基因株系。采集轉(zhuǎn)基因株系中發(fā)芽的幼苗、蓮座葉、莖生葉、花、莢果以及發(fā)育成熟各個時期的種子等組織材料，利用 X-Gluc 溶液進行著色后表且不同株系間表型基本相同，故選取其中最典型的一個株系作為展示分析，如圖示。A B C D

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3111473