目的:雄性生殖細胞從具有有絲分裂活性的原始生殖細胞發(fā)育為成熟精子的過程被稱為精子發(fā)生。精子發(fā)生起源于精原干細胞,分為精原細胞的有絲分裂期、精母細胞的減數(shù)分裂期和精子形成期三個階段。精原細胞經(jīng)歷有絲分裂后在精子形成期發(fā)生一系列復雜的結構重塑最終形成成熟精子。許多與精子形成期相關的基因在雄性生殖細胞發(fā)育的早期如精原細胞中已經(jīng)開始轉錄,此時轉錄的m RNA在細胞發(fā)育至后期時才被翻譯為蛋白質并發(fā)揮功能。精卵發(fā)生特異表達螺旋-環(huán)-螺旋轉錄因子1（Spermatogenesis-and oogenesis-specific b HLH transcription factor-1,Sohlh1）在雄性生殖細胞中主要表達于A1-A4型精原細胞,編碼蛋白含有一個b HLH結構域,可以形成異二聚體或同型二聚體與DNA上的E-box序列CANNTG結合調控下游基因的表達。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)Sohlh1基因敲除雄性小鼠不育,精原細胞發(fā)育及分化異常導致進入減數(shù)分裂的精母細胞減少,無成熟精子產(chǎn)生�；蛐酒瑱z測結果顯示出生后7天野生型雄鼠與Sohlh1基因敲除雄鼠睪丸組織中Sox30、Rnf17等精子發(fā)生中關鍵... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術路線圖

中國醫(yī)科大學碩士學位論文截短片段 DNA 序列，見圖 3。綜合分析 Sox30 啟動子序列、pMD18-T Vector 和 pGL3.0-Basic Vector 上的共用酶切位點，選取啟動子上游引物 5′端的 KpnⅠ酶切位點和位于下游引物 3′端的 HindIII 酶切位點，利用雙酶切法獲得啟動子序列，并將目的序列連接到pMD18-T Vector 和 pGL3.0-Basic Vector 上，載體信息見圖 4。

圖 4. pMD18-T Vector 結構示意圖及 pGL3.0-BasicVector 結構示意圖 Sox30 啟動子全長和啟動子截短序列的 pMD18-T-Sox30 質x30 基因啟動子片段的擴增及純化 DNA 為 PCR 反 應 的 擴 增 模 板 ， 使 用 NEB Q5DN-Fidelity DNA Polymerase）擴增 Sox30 基因的啟動子全長及截短片應體系：劑 使用量 8High-Fidelity DNA Polymerase 0.5 μlQ5Amplification Buffer 10.0 μlQ5High GC Enhancer 10.0 μlTP（2.5 μM) 4.0 μlrward primer（10 μM） 2.5 μlverse primer（10 μM） 2.5 μl


本文編號：3096607