細胞因子是一類小分子可溶性蛋白,對動物的固有免疫和適應性免疫起著十分重要的作用。IFN-γ和IL-10作為較為重要的細胞因子,吸引了眾多研究者的關注。IFN-γ能直接調(diào)動體內(nèi)的多種免疫原細胞的增殖與分化,參與所有的I型輔助T細胞（Th1細胞）的免疫反應;IL-10能抑制炎癥反應并提高體內(nèi)免疫系統(tǒng)對外來細菌和病毒的應答反應。本實驗首先利用基因工程技術(shù),表達純化得到了鼠源的IFN-γ和IL-10蛋白。利用單克隆抗體技術(shù),篩選出15株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞株（分泌IFN-γ抗體的雜交瘤細胞株2株,分泌IL-10抗體的雜交瘤細胞株13株）。對分泌IFN-γ抗體的雜交瘤細胞株2D8進行亞型鑒定結(jié)果為Ig G2a型。將雜交瘤細胞2D8按照每只10⁶個的劑量注入提前用弗氏不完全佐劑處理的小鼠腹腔,通過腹水采集和純化獲得了IFN-γ抗體。本工作中表達純化得到的IFN-γ和IL-10蛋白,可以為其他研究者進一步研究這兩種鼠源細胞因子結(jié)構(gòu)與功能及其相關疾病提供重要的物質(zhì)基礎,通過單克隆抗體技術(shù)得到能穩(wěn)定分泌IFN-γ和IL-10抗體的雜交瘤細胞,可以為后續(xù)建立雙抗夾心ELISA方法... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

IFN-的結(jié)構(gòu)（王海春2012）

IL-10的結(jié)構(gòu)（Walteretal1995）

華中農(nóng)業(yè)大學2020屆碩士研究生學位（畢業(yè)）論文12圖1.3單克隆抗體的制備流程（張帝等2014）Fig1.3Preparationprocessofmonoclonalantibody1.6本研究的目的及意義細胞因子作為各種免疫細胞和一部分非免疫細胞所分泌的可溶性小分子蛋白質(zhì)，對機體具有極其廣泛的生物學效應，包括調(diào)節(jié)機體的免疫應答，細胞間的信號傳遞，調(diào)控免疫細胞的分裂與分化等。IFN-和IL-10是動物體內(nèi)較為重要的兩種細胞因子，IFN-作為最重要的炎癥細胞因子，直接或間接參與著機體中所有的免疫反應；IL-10作為生物活性最強的炎癥抑制因子，能直接參與機體內(nèi)Th1和Th2細胞間免疫調(diào)節(jié)。因此，這兩種細胞因子的表達水平可以反映動物體的健康狀態(tài)�；诖�，本研究首先利用大腸桿菌表達系統(tǒng)，外源表達獲得鼠IFN-和IL-10兩種重組細胞因子。利用這兩種重組細胞因子免疫小鼠，通過細胞融合以及亞克隆技術(shù)得到了能穩(wěn)定分泌IFN-和IL-10的雜交瘤細胞�？傊緦嶒灥玫搅耸蟮腎FN-、IL-10細胞因子蛋白以及相應的抗體，為進一步研究其結(jié)構(gòu)和功能奠定了基矗篩選得到的雜交瘤細胞，也是后續(xù)建立雙抗夾心ELISA檢測方法的關鍵。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]水牛IFN-γ克隆表達及其單克隆抗體的制備與應用[D]. 鄒新峰.華中農(nóng)業(yè)大學 2011
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本文編號：3090443