常規(guī)聚合酶鏈式反應(yīng)對反應(yīng)條件的要求很高,需要在多個溫度下進行循環(huán),而核酸等溫擴增僅需在恒定溫度下就能進行核酸的高效快速擴增。離心式微流控芯片技術(shù)具有微型化、集成化、高通量、自動化等優(yōu)勢,可實現(xiàn)實時、低成本生化檢測分析。本文介紹了離心微流控芯片技術(shù)在核酸擴增前處理和核酸等溫擴增中的應(yīng)用,主要包括核酸提取、試劑預(yù)存儲和核酸等溫擴增等方面,并且對離心微流控芯片技術(shù)用于核酸等溫擴增中存在的問題與未來的發(fā)展方向進行分析討論。 

【文章來源】：工業(yè)微生物. 2020,50(06)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

離心式微流控芯片的前處理

CHEN J等[31]，研發(fā)出一種便攜式過濾移液器，可從尿液樣本中檢測出五種不同的致病菌。芯片的操作流程如圖2B所示:首先將磁力攪拌子與氧化鋯珠預(yù)封裝于芯片裂解腔(b)內(nèi)，通過芯片的入口(a)將細菌懸浮液添加到裂解腔(b),RPA混合溶液添加至儲存腔(c)中，并將所有的進出口都用膠帶密封。隨后把芯片放在定制的磁力攪拌器上，用芯片磁珠裂解法將細菌裂解。其次RPA混合物以100r/min的轉(zhuǎn)速流動到第一個虹吸閥(Ⅰ)，再將細菌裂解物以3 000 r/min流動到定量室(d)中。將轉(zhuǎn)速降低至50 r/min,RPA混合溶液流動到第二個虹吸閥(Ⅱ)中，同時裂解物也流動至虹吸閥(Ⅲ)中，同時進入混合腔(e)。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速500 r/min至4 000r/min使細菌裂解物與RPA混合液在混合腔進行混合。最終調(diào)節(jié)1 000 r/min的轉(zhuǎn)速使溶液在等分腔(f)中等分，再以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速分配到各反應(yīng)腔室(g)中進行實時RPA擴增及熒光檢測。此方法能夠在39℃下反應(yīng)30 min從尿液樣品中成功檢測到大腸桿菌，變形桿菌，銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。KIM T H等[32]研發(fā)出一種離心微流控驅(qū)動檢測設(shè)備。在等溫擴增步驟中，可以通過單個激光二極管用于閥門驅(qū)動、細胞裂解和非接觸無線控制的加熱功能，研發(fā)出緊湊而小型的系統(tǒng)。其能夠?qū)NA提取、等溫重組酶聚合酶擴增和檢測的三個主要步驟一體化，可用于微量沙門氏菌核酸分析系統(tǒng)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]濃度梯度微流控芯片平臺的構(gòu)建及其應(yīng)用于抗白念珠菌藥物快速篩選研究[J]. 蔡穎,陳陽,洪戰(zhàn)英,柴逸峰.  藥學(xué)學(xué)報. 2020(02)
[2]用于五種動物源性成分快速檢測的離心式微流控芯片系統(tǒng)研制[J]. 周新麗,申炳陽,高麗娟,孔兵,葉嘉明.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2020(03)
[3]基于PCR技術(shù)的DNA分析測試關(guān)鍵要素[J]. 安娜,柳方方,董美,胡曉穎,宛煜嵩,金蕪軍,蘭青闊,李亮,韓陽.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2019(02)
[4]食源性致病菌高通量檢測方法及應(yīng)用[J]. 吳海平.  工業(yè)微生物. 2012 (02)



本文編號：3074415