篤斯越桔（Vaccinium uliginosum Linn.）是長(zhǎng)白山苔原帶的優(yōu)勢(shì)植被之一,因其生長(zhǎng)在海拔2000—2500m的高山環(huán)境條件下,生長(zhǎng)季節(jié)短,一年內(nèi)大部分時(shí)間生長(zhǎng)在寒冷或積雪環(huán)境條件下。根據(jù)達(dá)爾文的“適者生存”的進(jìn)化機(jī)制,篤斯越桔在長(zhǎng)白山高山苔原帶的逆境條件下一定擁有其內(nèi)在抗逆適應(yīng)機(jī)制。作為植物體內(nèi)無(wú)所不在的共生物,內(nèi)生真菌在篤斯越桔的適應(yīng)進(jìn)化過(guò)程中一定起著非常重要的作用。因受長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)嚴(yán)格生物多樣性保護(hù)管理措施的限制,長(zhǎng)白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌還未見(jiàn)有系統(tǒng)的研究報(bào)道。作為長(zhǎng)白山森林生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,植物內(nèi)生真菌的功能還未得到深入闡述。另外,隨著越來(lái)越多的植物內(nèi)生真菌的藥用代謝產(chǎn)物資源的發(fā)現(xiàn),對(duì)特殊生境下的篤斯越桔內(nèi)生真菌的研究則更有現(xiàn)實(shí)研究意義。因此,本文于2018和2019年的生長(zhǎng)季節(jié)對(duì)長(zhǎng)白山苔原篤斯越桔進(jìn)行了植株樣品采集,并利用組織學(xué)分離鑒定技術(shù)和高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合的方法,對(duì)不同時(shí)期、不同海拔的長(zhǎng)白山苔原帶篤斯越桔不同組織部位的內(nèi)生真菌多樣性進(jìn)行了調(diào)查分析。此外,篤斯越桔中可分離出大量有效活性成分。鑒于內(nèi)生真菌通過(guò)發(fā)酵等方式可產(chǎn)與寄主植物相同或相似... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

菌株基因組DNA電泳檢測(cè)圖

長(zhǎng)白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌的多樣性及其代謝產(chǎn)物的研究15圖2.2宏基因組文庫(kù)的構(gòu)建Fig.2.2Metagenomiclibraryconstructionprocess2.2.6內(nèi)生真菌多樣性高通量測(cè)序分析對(duì)測(cè)序得到的原始reads進(jìn)行質(zhì)量控制，并過(guò)濾得到Cleanreads，對(duì)Cleanreads進(jìn)行拼接組裝，預(yù)測(cè)編碼基因，并對(duì)編碼基因進(jìn)行通用數(shù)據(jù)庫(kù)和專(zhuān)用數(shù)據(jù)庫(kù)的功能注釋?zhuān)粚?duì)Cleanreads進(jìn)行分類(lèi)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)樣品物種組成和豐度信息。使用MEGAHIT軟件進(jìn)行宏基因組組裝，過(guò)濾短于300bp的序列。使用cd-hit軟件去除冗余，相似性閾值為95%，覆蓋度閾值為90%。通過(guò)將非冗余基因的蛋白序列和Nr數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)，找到在Nr數(shù)據(jù)庫(kù)中最相似的序列，該序列對(duì)應(yīng)的注釋信息即為對(duì)應(yīng)測(cè)序基因組基因的注釋信息，比對(duì)后可得到樣品的物種組成和相對(duì)豐度信息。2.3結(jié)果與討論2.3.1長(zhǎng)白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌鑒定結(jié)果于2018、2019兩年的7、8、9月份從長(zhǎng)白山苔原帶采集到150個(gè)篤斯越桔樣品，利用組織學(xué)方法從這150個(gè)樣品分成的1500個(gè)組織塊中總共分離得到775株內(nèi)生真菌，發(fā)現(xiàn)在篤斯越桔上存在大量?jī)?nèi)生真菌。經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為4門(mén)、21目、31科、48屬。根據(jù)相對(duì)分離頻率（RF）分析篤斯越桔內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)度，一般認(rèn)為，RF≥10%的內(nèi)生真菌為優(yōu)勢(shì)菌，RF≥1%的為常見(jiàn)菌，RF<1%的為稀有菌[91]，具體結(jié)果見(jiàn)表2.1。在所分離到的48屬內(nèi)生真菌中，Alternaria（16.90%）、Fusarium（14.06%）為優(yōu)勢(shì)菌群，Colletotrichum（6.45%）、Nigrospora（6.06%）次之。已有研究表明，本文分離到的優(yōu)勢(shì)菌Alternaria為普遍存在的真菌類(lèi)型，在多種植物的組織和土壤中廣泛存在[92,93]，F(xiàn)usarium是普遍存在于植物中的內(nèi)生真菌，并且在

長(zhǎng)白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌的多樣性及其代謝產(chǎn)物的研究27圖2.6在門(mén)水平上篤斯越桔內(nèi)生真菌群落組成及其相對(duì)豐度Fig.2.6CommunitycompositionandrelativeabundanceofendophyticfungiinVacciniumuliginosumatphylalevel圖2.7在科水平上篤斯越桔內(nèi)生真菌群落組成及其相對(duì)豐度Fig.2.7CommunitycompositionandrelativeabundanceofendophyticfungiinVacciniumuliginosum


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