PGC7（Primordial germ cell 7）是一個固有無序蛋白,能夠與多種蛋白產(chǎn)生互作關系,并參與多個生物學過程,如保護母源印記,調(diào)控早期胚胎發(fā)育,維持細胞多能性,促進體細胞重編程等。我們前期研究表明,異染色質(zhì)結合蛋白HP1BP3是PGC7互作蛋白之一,二者能夠通過改變?nèi)旧|(zhì)的濃縮狀態(tài)參與印記基因GTL2的表達調(diào)控,進而影響細胞多能性。此外,PGC7能夠影響HP1α與HP1BP3之間的互作關系。在這項研究的基礎上,本文發(fā)現(xiàn)PGC7還能夠與HP1α蛋白互作。HP1α是重要的異染色質(zhì)結構性蛋白,通常參與異染色質(zhì)高級結構建立,基因表達調(diào)控和細胞周期調(diào)控等過程�；赑GC7和HP1α的互作關系,本文分別從這兩個蛋白各自的功能出發(fā),通過實時定量PCR（Quantitative Real time PCR,qRT-PCR）、免疫印記（Western blot）、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）、CRISPR-Cas9、堿性磷酸酶染色（AP染色）、流式細胞周期檢測等技術,探討了二者在細胞多能性維持和細胞周期調(diào)控中的作用。研究結果如下:1.本文首先利用... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 PGC7及HP1α的結構及生物學功能
        1.1.1 PGC結構及功能概述
        1.1.2 HP1α結構及功能概述
    1.2 多能性維持和表觀遺傳調(diào)控
        1.2.1 干細胞與細胞多能性
        1.2.2 DNA甲基化及組蛋白修飾
        1.2.3 基因組印記與多能性維持
        1.2.4 H19 參與細胞多能性維持
    1.3 細胞周期的動態(tài)調(diào)控
        1.3.1 組蛋白翻譯后修飾與細胞周期
        1.3.2 HP1 參與細胞周期進程
第二章 PGC7與HP1α互作關系鑒定及HP1α敲除細胞系構建
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料及儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要溶液配制
        2.1.4 實驗方法
    2.2 實驗結果
        2.2.1 HP1α載體構建及蛋白表達
        2.2.2 HP1α與 PGC7 互作關系驗證
        2.2.3 HP1α敲除細胞系構建
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 PGC7與HP1α對細胞多能性的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料及儀器
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要溶液配制
        3.1.4 實驗方法
    3.2 實驗結果
        3.2.1 HP1α敲除對細胞甲基化的影響
        3.2.2 HP1α敲除對印記基因表達的影響
        3.2.3 HP1α敲除對H19 印記調(diào)控區(qū)甲基化水平的影響
        3.2.4 HP1α與 PGC7 參與多能性因子表達調(diào)控
    3.3 討論
    3.4 小結
第四章 PGC7與HP1α參與調(diào)控細胞周期進程
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料及儀器
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要溶液配制
        4.1.4 實驗方法
    4.2 實驗結果
        4.2.1 HP1α影響細胞周期進程
        4.2.2 PGC7與HP1α參與細胞增殖及細胞周期調(diào)控
        4.2.3 PGC7 影響H3K9me3和H3S10ph水平
        4.2.4 PGC7與HP1α影響細胞周期相關蛋白表達
    4.3 討論
    4.4 小結
全文總結
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3005034