類植物乳桿菌（Lactobacillus paraplantarum）,是一種具有多種益生特性的乳酸菌。隨著基因編輯技術(shù)的發(fā)展,人們對類植物乳桿菌不再是僅局限于基本的生理性能的探究,對其遺傳操作的研究是目前研究的熱點內(nèi)容。目前已有研究表明CRISPR/Cas技術(shù)可用于乳酸菌的基因編輯。由于類植物乳桿菌復(fù)雜且致密的細胞壁結(jié)構(gòu),使得外源質(zhì)粒的轉(zhuǎn)入變得困難,限制其遺傳操作的研究。因此本研究將從構(gòu)建CRISPR/Cas基因編輯載體和探究轉(zhuǎn)化條件兩方面著手。本研究以質(zhì)粒pLCNICK、pLP-gba為基礎(chǔ),從質(zhì)粒pLCNICK上擴增出Cas9啟動子片段和紅霉素抗性基因終止子片段,與從質(zhì)粒pLP-gba擴增的LP404142融合基因CDS區(qū)片段,通過Easy Geno快速重組克隆方法克隆到線性pUC19載體上,命名為質(zhì)粒A。然后從質(zhì)粒pLCNICK上擴增出包含卡那霉素抗性基因-gRNA基因的長片段,和包含啟動子與終止子的紅霉素抗性基因片段,克隆到線性pUC19載體上,命名為質(zhì)粒B。最后把質(zhì)粒A上啟動子-LP404142-終止子片段與質(zhì)粒B上卡那霉素-gRNA-紅霉素基因片段和質(zhì)粒pLCNICK的C... 

【文章來源】：河北經(jīng)貿(mào)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CRISPR/Cas基本結(jié)構(gòu)

pLCNICK質(zhì)粒圖

圖 3 pUC19 質(zhì)粒圖及儀器設(shè)備錄表 1，儀器設(shè)備見附錄表 2�；叭芤海嘿徸蕴旄萍加邢薰尽；嘿徸蕴旄萍加邢薰�。（液體）：牛肉膏 10 g、蛋白胨 10 g、酵母膏 5 g、酸氫二銨 2 g、磷酸氫二鉀 2 g、硫酸鎂 0.58 g、硫酸


本文編號：2946496